Fagocitosis y destino intracelular de dos cepas del género Bifidobacterium en células THP-1

ASSAD, S E; ROLNY I.S.; MINNAARD J; PEREZ P.F.

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología ALAM-CAM; 2016

Las bifidobacterias son microorganismos intestinales potencialmente probióticos y su interacción con células fagocíticas podría ser un paso clave para el efecto inmunomodulador.Hemos demostrado que la interacción de estas bacterias con células THP-1 es dependiente de la cepa evidenciándose una mayor fagocitosis deBifidobacterium bifidum CIDCA 5310 comparado con B. adolescentis CIDCA 5317. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la internalización y el destino intracelular de estos microorganismos en células THP-1 en condiciones no opsónicas.La línea THP-1 fue diferenciada con acetato de forbol miristato por 3 días (37°C 5% de CO2). Las cepas CIDCA 5310 y CIDCA 5317 crecidas en caldo MRS suplementado con cisteína 0,05% en anaerobiosis (37°C, 48hs) y marcadas con isotiocianato de fluoresceína, se incubaron con células THP-1 en diferentes relaciones bacterias/célula (MDI) durante 1 h a 37°C.La fagocitosis se evaluó mediante citometría de flujo luego de tratar las muestras con azul tripan para apantallar la fluorescencia de bacterias no internalizadas y se calculó el índice de fagocitosis (IF)= eventos FL1 (+) x intensidad de fluorescencia media.Para estudiar la localización intracelular de las bacterias se utilizó MDI=10 y los compartimentos celulares se marcaron con un marcador lisosomal (Lysotracker DND-99 200 nM 5 minutos) o con un marcador de receptores de reciclaje que no trafica por vía lisosomal (Transferrina- Alexa-594 10 μg/ml 10 minutos). La toma de imágenes fue realizada con un microscopio confocal (LEICA TCS SP5, Leica Microscopy Systems Ltd. CH Heerbrugg, Suiza) y el análisis de colocalización de bacterias en los diferentes compartimentos se realizó con el software Leica LAS AF Lite estudiándose al menos 200 células por muestra.Los resultados mostraron un aumento de los índices de fagocitosis en función de la MDI. Para la cepa CIDCA 5310 los valores de IF fueron de 655,10 ± 88,85 y 5195,54 ± 126,76 para MDI 2 y 20 respectivamente mientras que para la cepa CIDCA 5317, los IF fueron de 127,38 ± 0,82 y 1881,75 ± 91,49 para MDI 2 y 20 respectivamente.Respecto al destino intracelular de los microorganismos, la microscopia confocal reveló mayores porcentaje de colocalización con lisosomas para la cepa CIDCA 5310 (63.8 ± 0,42 %) que para la cepa CIDCA 5317 (27,15 ± 12,79 % p< 0,05). En contraste, ambas cepas mostraron valores bajos de colocalización con endosomas de reciclaje (CIDCA 5310: 9.4 ± 1,83% y CIDCA 5317: 9.5 ± 9,05 %).La interacción diferencial de las cepas CIDCA 5310 y CIDCA 5317 con fagocitos determina su tráfico hacia compartimentos intracelulares. Aún en condiciones no opsónicas, las bacterias estudiadas se localizan rápidamente en compartimentos lisosomales aunque los diferentes valores de colocalización hallados sugerirían una cinética dependiente de la cepa lo cual podría conducir a diferentes respuestas del hospedador frente a estos microorganismos.