Estudio de la virulencia de Bacillus cereus mediante analisis multivariado

MINNAARD, J; DELFEDERICO, L.; VASSEUR, V.; HOLLMANN, A.; ROLNY, I.; SEMORILE, L.; PEREZ, P.F.

Córdoba

Congreso; XI Congreso Argentino de Microbiología; 2007

AAM

Bacillus cereus es un microorganismo esporulado oportunista capaz de producir enfermedades no intestinales e intestinales; su virulencia se debe a varios factores extracelulares y al contacto bacteria-célula eucariótica. El objetivo de este estudio fue determinar, mediante análisis multivariado, la relación entre perfiles de rRNA, presencia de genes de virulencia y actividad biológica sobre enterocitos humanos en cepas de B. cereus. En 21 cepas de B. cereus se estudió la actividad biológica (desprendimiento celular, efecto sobre la actividad deshidrogenasa mitocondrial, necrosis y hemólisis) utilizando enterocitos (Caco-2). La presencia de secuencias de ADN relacionadas con genes de virulencia se determinó por PCR. Los perfiles de rRNA se determinaron luego de la digestión del ADN por EcoRI. Los sobrenadantes de cultivos produjeron efecto citopático y diferentes grados de desprendimiento celular. También disminuyeron la actividad deshidrogenasa mitocondrial, produjeron necrosis y diferentes títulos de hemólisis. La infección por bacterias vegetativas provocó desprendimiento celular luego de 3 h de incubación Se determinó la presencia de los genes de virulencia entS, entFM, nhe (A, B y C), sph, hbl (A, B, C y D), piplC and bceT. Seis cepas fueron positivas para todos los genes ensayados. Las cepas se agrupan en dos clusters; el cluster mayoritario incluye 5 cepas que fueron positivas para todas las secuencias ensayadas. En el análisis de componentes principales se observaron tanto correlaciones negativas como positivas entre las variables en estudio. La capacidad de desprendimiento luego de la infección muestra una tendencia de correlación negativa con la presencia de los genes entS y nheB y positiva con las secuencias entS, nheC y sph. El complejo hbl mostró alta correlación y el complejo nhe baja correlación entre sus genes respectivamente. Las cepas positivas para todas las secuencias de ADN fueron de alta capacidad de desprendimiento pero mostraron muy distintas capacidades de desprender enterocitos luego de la infección. Nuestros resultados realzan el carácter multifactorial de la virulencia del grupo B. cereus y muestran la correlación entre los perfiles de ARN, genes de toxinas y actividad biológica de las cepas que se estudiaron. Este análisis permitiría hallar relaciones entre genes de virulencia para orientar los estudios de factores de virulencia.