Determinación de vitamina B12 en suplementos vitamínicos y fármacos por HPLC para la enseñanza en química analítica

MAMMANA, SABRINA B.; ALTAMIRANO, JORGELINA C.

Congreso; VIII CONGRESO ARGENTINO DE QUIMICA ANALITICA; 2015

La vitamina B12 (cianocobalamina) es indispensable para el cuerpo humano. Su principal función es producir glóbulos rojos, blancos y plaquetas; regular la síntesis de proteínas, grasas y carbohidratos, estimular el apetito y mejorar la memoria y la concentración. Esta vitamina, es incorporada al organismo por la ingesta diaria, y puede ser adquirida, además, mediante suplementos vitamínicos y algunos medicamentos [1]. La vitamina B12 es un analito compatible con columnas de HPLC en fase reversa y con detección UV-vis [2] por lo que se la puede utilizar como ejemplo didáctico. El objetivo es que los alumnos puedan conocer y caracterizar un equipo cromatográfico utilizando HPLC. Además, se busca que lo los ensayos premitan comprender y visualizar conceptos básicos de cromatografía líquida y estimar los parámetros críticos que gobierna el proceso cromatográfico (k´, α, R, etc.) mediante la modificación de parámetros experimentales (tipos de solventes, temperatura, composición de la fase móvil, etc). El objetivo final es aplicar una metodología analítica basada en HPLC de fase reversa para la determinación de cianocobalamina (vitamina B12) en formulaciones farmacéuticas.La metodología de trabajo incluyó una explicación de cada módulo del equipo, su manejo y cuidados que requiere. Posteriormente a la estabilización del equipo, se procedió a inyectar un patrón de cianocobalamina de 1 mg/ml y se realizaron corridas cromatográficas con una columna de fase reversa C18 y una fase móvil de metanol:agua. Se realizaron corridas con distintas proporciones de metanol en la fase estacionaria para estimar k´ y α, lo cual informaron luego los alumnos en el informe, junto con el resto de las determinaciones. Las presentaciones de vitamina B12 consideradas fueron pastillas, polvo y líquida. La metodología analítica incluyó una etapa de preparación de muestra en la que los productos farmacéuticos fueron triturando en mortero y disueltos en agua ultrapura o diluidos, según correspondiera. A continuación, las muestras fueron filtradas para ser inyectadas al equipo cromatográfico. Se identificó el analito de interés mediante comparación con el tiempo de retención del patrón inyectado previamente. Para el posterior análisis cuantitativo de productos farmacéuticos, se realizó una curva de calibración con un patrón de cianocobalamina con concentraciones entre 0,01 mg/ml y 0,21 mg/ml basada en áreas de pico cromatográficas.La estrategia utilizada permitió a los alumnos visualizar, fijar y ejercitar conceptos teóricos los cuales fueron posteriormente aplicados a la resolución de un caso real.