PRESENCIA DE CLOSTRIDIUM PERFRINGENS EN TRUCHA ARCOÍRIS ONCORHYNCHUS MYKISS DE CULTIVO EN PATAGONIA ANDINA.

EN PAREDERO; CA RAUQUE; RB MARCELLINO; AC MIGNAQUI; F GHERSA; JS PAPPALARDO

VIRTUAL - Bariloche

Congreso; XXIII Reunión Científico Técnica de la AAVLD: Modalidad Virtual; 2021

AAVLD

PRESENCIA DE CLOSTRIDIUMPERFRINGENS EN TRUCHA ARCOÍRIS ONCORHYNCHUSMYKISS DE CULTIVO EN PATAGONIA ANDINA.F Ghersa1,2, RB Marcellino1,3, ENParedero1, JS Pappalardo1,3, AC Mignaqui1,3, CARauque21Grupo deNanomedicina Veterinaria - INTA-EEA Bariloche, 2INIBIOMA(UNCo-CONICET), 3IFAB (INTA-CONICET)e-mail: mignaqui.anaclara@inta.gob.ar INTRODUCCIÓN: La acuicultura enArgentina se instauró en la década de 1970 con el cultivo de trucha arcoíris,siendo en la actualidad una actividad importante en Patagonia Norte. Como en todaproducción animal, los peces también están expuestos a diferentes patógenos,algunos de los cuales causan pérdidas económicas importantes. En los últimosaños la microbiota intestinal de peces ha comenzado a ser estudiada, aunque encomparación con los animales terrestres, se conoce muy poco de la misma y eneste sentido la trucha arcoíris no es la excepción (Lyons et al., 2016). Clostridium perfringens es una bacteria dedistribución ubicua, presente en muchos ambientes, incluyendo el tractogastrointestinal de animales y personas (Mignaqui et al., 2017). Esta bacteria es capaz de causar enfermedadesseveras en animales de producción y en humanos. Según su capacidad paraproducir diferentes toxinas se clasifica en 7 distintos toxinotipos desde la A ala G (Freedman et al., 2014, Rood et al., 2018) (Tabla 1).Elhallazgo de C. perfringens en animales de producción constituye unaamenaza potencial, dado que cuando el animal sufre una situación de estrés ocambios bruscos en su dieta, esta bacteria prolifera liberando más cantidad detoxinas al medio intestinal causando enfermedades y por lo tanto pérdidaseconómicas. Los escasos estudios que se han realizado sobre la presencia deesta bacteria en peces encontraron que se halla en mayor cantidad en intestinosde peces de aguas contaminadas, siendo escaso el hallazgo de la misma en pecesde aguas de mejor calidad (Matches et al.,1974). La calidad del agua en la Patagonia es alta, siendo sus fuentes deorigen glaciar y de vertientes naturales, produciendo arroyos limpios y fríos.Aunque las condiciones del agua son excelentes, ha habido un fuerte incrementode la población humana durante las últimas décadas, impactando negativamentesobre la calidad del agua. En el cultivo, los peces son manipulados intensamentedurante la época de desove y su crecimiento es controlado mediante la alimentación,siendo ambos factores productores de altos niveles de estrés.El objetivo del presente trabajo fuedeterminar la presencia de C. perfringensen el intestino de truchas arcoíris del Centro Salmonicultura Bariloche mediantetécnicas de biología molecular y bacteriología tradicional. MATERIALES Y MÉTODOS:Se tomaron muestras del intestino de truchas arcoíris (n=46) del Centro deSalmonicultura Bariloche dependiente de la Universidad Nacional del Comahue.Las muestras se procesaron inmediatamente en forma aséptica en cabina deseguridad biológica. Lasmuestras se sembraron en caldo cerebro corazón y se incubaron a 37 °C por 24 hen jarras de anaerobiosis con una atmósfera de 95% H2 y 5% CO2.Se utilizaron 100 µl de caldo cerebro corazón para sembrar placas de agarsangre con neomicina (100 µg/mL). Las placas se incubaron en anaerobiosisnuevamente por 24 h. Las colonias con doble halo de hemólisis compatibles con C.perfringens se identificaron con la tinción de Gram y las pruebasbioquímicas: catalasa, lecitinasa, lipasa, CAMP y aerotolerancia. Por otrolado, se realizó la extracción de ADN mezclando 20 µL de caldo cerebro corazóncon 150 µL de la resina Chelex, se incubó 20 min a 65 °C, 8 min a 100 °C, secentrifugó 2 min a 10.000 g y se recuperó el sobrenadante. El ADN extraído seutilizó como templado en una PCR utilizando cebadores previamente descriptos delgen cpa, cpb, ETX, cpe, cpb2 y iA, que codifican para las toxinas alfa, beta,épsilon, enterotoxina, beta2 e iota respectivamente. Se utilizaron lassiguientes condiciones 10 mM dNTPs, 2mM MgCl2, 2 × PCR buffer Taq Pegasus(PB-L, Argentina), 1,25 U DNA Taq Pegasus, 1 µL de ADN y agua hasta completar25 µL. Las condiciones de ciclado fueron las siguientes: 25 ciclos a 95 ºC por1 min, 53 ºC por 1 min 72 ºC por 1 min y un paso adicional de 10 min a 72°C.RESULTADOS: Por PCR se observaron8,7% de las muestras positivas para el gen cpa (n=4), es decir que fueron positivaspara C. perfringens, mientras que por bacteriología se aisló en tresmuestras (6,5%), en todos los casos con menos de 5 UFC. No se detectaron otras toxinaspor lo que todas las muestras obtenidas de C.perfringens son del toxinotipo A. Sumado C. perfringens se recuperó1 aislamiento de Clostridium spp.CONCLUSIONES Y DISCUCIÓN:C. perfringens es una bacteria dedistribución ubicua que posee un riesgo potencial para la salud animal causandotanto pérdidas económicas en las producciones como pudiendo afectar la saludhumana. La evaluación de esta bacteria complementa los análisis sanitarios quese pueden hacer en los establecimientos. En el presente trabajo, fue posibledetectar la presencia de la bacteria por biología molecular y obteneraislamientos por bacteriología. Si bien el porcentaje de presencia de estabacteria fue bajo, indicando una buena calidad del producto y buenascondiciones del agua, debe seguir evaluándose en otros muestreos ya que lainformación disponible es escasa. Este es el primer registro de C. perfringens en peces de cultivo de laPatagonia Argentina. BIBLIOGRAFIA:Lyons et al. 2016. Phylogenetic and functionalcharacterization of the distal intestinal microbiome of rainbow trout Oncorhynchus mykiss from both farm andaquarium settings. J. Appl. Microbiol. 2017 Feb;122(2):347-363. doi:10.1111/jam.13347. Epub 2016 Dec 6. PMID: 27860093.Mignaqui et al. 2016. Isolation and molecularcharacterization of Clostridiumperfringens from healthy Merino lambs in Patagonia Region, Argentina.Anaerobe 43 (2017) 35-38.Freedmanet al. 2014. Clostridium perfringens type A-Etoxin plasmids. Institut Pasteur. Research in Microbiology 166 (2015) 264-279.Roodet al. 2018. Expansion of the Clostridiumperfringens toxin-based typing scheme. Anaerobe 53 5-10.Matcheset al. 1974. Clostridium perfringens in the environment. Applied Microbiology,Oct 1974, p 665-660.