Identificación y caracterización de un gen que codifica para lacasa del hongo Phlebia brevispora

MOLINA MELISA ANTONELLA; WINNIK DANIANA; FARIÑA JULIA INÉS; BUSSI MARÍA VICTORIA; VILLALBA LAURA; ZAPATA PEDRO; FONSECA MARÍA ISABEL

Mendoza

Congreso; Congreso Nacional de Micología Carlos Spegazzini 2017, XXXVI Jornadas Argentinas de Botánica,; 2017

Asociación Micológica Carlos Speganzzini

Las lacasas pertenecen a la familia proteica de las multicobre oxidasas. Estas enzimas han sido encontradas en hongos como Phlebia brevispora. Las lacasas pueden ser aplicadas en la deslignificación de la pulpa, detoxificación de químicos recalcitrantes, degradación de compuestos policíclicos aromáticos, biorremediación de suelos y aguas contaminadas. El objetivo del presente trabajo fue identificar y clonar un gen que codifica para lacasa del hongo P. brevispora. Para ello se extrajo ADN y se amplificó por PCR la región I y IV de unión al cobre y las regiones 5 y 3´se obtuvieron por PCR inversa. Todos los fragmentos obtenidos se clonaron en pGEMT utilizando Escherichia coli como hospedero, las colonias blancas fueron seleccionadas y los plásmidos se obtuvieron por lisis alcalina para su secuenciación. Una secuencia de 2748 pb perteneciente a una lacasa fue identificada y caracterizada, incluyendo 13 exones y 12 intrones, el cual genera una proteína madura de 521 aminoácidos con un péptido señal de 20 aminoácidos y ocho posibles sitios de glicosilación. Elementos reguladores propios de eucariotas como cajas TATA, cajas CAAT y cajas CAAT invertidas fueron encontrados, así como sitios de regulación a cobre (ACE), metales (MRE), antioxidante (ARE), nitrógeno (NIT) y calor (HSE). Estos resultados pueden ayudar a optimizar la fermentación para la producción de lacasa fúngicas, y también abrir nuevas fronteras para la ingeniería de promotores fuertes para la producción.