Evaluación de la citoxicidad de los péptidos antimicrobianos sintetizados por Enterococcus avium DSMZ17511 y Enterococcus faecium SM21

C. IBARGUREN; M.C. SORIA; P. HOVANYECZ,; C.E.BANCHIO; M.C. AUDISIO

Rosario, Santa Fe

Congreso; XXIII Congreso latinoamericano de Microbiología. XIV Congreso Argentina de Microbiología; 2016

Asociación Argentina de Microbiología

Algunas bacterias del género Enterococcus sintetizan péptidos con propiedades antimicrobianas frente a especies relacionadas, denominadas enterocinas. Estos metabolitos despiertan interés como biopreservantes naturales debido a su efecto sobre distintos patógenos de alimentos. Sin embargo, a pesar del carácter GRAS (Generally Recognized As Safe) de las bacterias lácticas, sus metabolitos no conservan tal propiedad; por lo tanto, es necesario asegurar su inocuidad. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la toxicidad in vitro de los metabolitos presentes en los sobrenadante libre de células (SLC) de E. avium DSMZ17511 y E. faecium SM21 frente a líneas celulares eucariotas.Se usaron dos fracciones de SLC de ambas cepas: SLC obtenido por centrifugación de cultivos frescos (SLCST); SLC concentrado por precipitación con sulfato de amonio (75%) y centrifugación-filtración (tubos Amicon Ultra 15-Millipore, cut-off 3kDa) (SLCcc). Para evaluar la citotoxicidad se empleó al prueba de Bromuro de 3-(4,5.dimetildiazol-2-il)-2,5 difenil tetrazolio (MTT) frente a células L929 (fibroblastos murinos ATCC CCL.2) y células Caco-2 (células epiteliales humanas derivadas de adenocarcinoma de colon ATCC HTB-3). Las células adherentes fueron cultivadas en microplaca e incubadas en estufa gaseada (37 °C, 5 %v/v CO2) durante 16-20 h. Las células adheridas se trataron con 5 μL de los distintos SLC y se mantuvieron por 24 h más en las condiciones de incubación. Transcurrido este período, el medio fue descartado y reemplazado por 100 μL de medio suplementado con solución de MTT (concentración final: 0,5 mg/mL) y las placas fueron incubadas en oscuridad (37 °C, 4 h). El precipitado coloreado resultante se disolvió en 100 μL de DMSO y su absorbancia se midió espectrofotométricamente (A570 nm). Como control negativo se usaron células incubadas con medio de cultivo y, como blanco, medio de cultivo sin células. Además, se incluyó como tratamiento el medio de cultivo (BHI) empleado para la obtención de los SLC. Los análisis fueron realizados por triplicado, en dos experimentos independientes.El análisis realizado en células Caco-2, no mostró diferencias en los valores de A570 nm entre los tratamientos respecto al control negativo. Aunque no se observó citotoxicidad marcada, hubo una disminución de la viabilidad en las células tratadas con SLCcc de ambas cepas respecto a los tratamientos conSLCST. En el caso de la línea celular L929, tampoco se observó citotoxicidad ante las cantidades de SLC agregadas, pero todos los tratamientos (SLC y BHI) indujeron un aumento de la A570nm sugiriendo una inducción en la proliferación celular por algún componente del medio de cultivo (BHI).Estos resultados son alentadores en cuanto a la inocuidad de los péptidos antimicrobianos presentes en los SLC de E. avium DSMZ17511 y E. faeciumSM21, teniendo en cuenta que ambos SLC fueron probados en concentraciones mayores a las adecuadas para la biopreservación de alimentos.