Desarrollo de un método para genotipado y detección de híbridos de zapallo a partir de ADN de semillas

CAVAGNARO, P. F.; BARBOZA-ROJAS, K.; DELLA GASPERA, P.; GALMARINI, C. R.

2016-05-01

2017-12-01

Produccion vegetal-Hortalizas

El cultivar de zapallo Aconcagua es un híbrido inter-especifico, producto del cruzamiento entre las especies Cucurbita maxima y Cucurbita moschata. Este cultivar posee ventajas significativas sobre otros cultivares. En los cruzamientos para producción de la semilla híbrida, C. máxima se usa como madre y C. moschata es el polinizador (padre). El zapallo es una especie diclina monoica, es decir que produce flores femeninas, masculinas y hermafroditas en la misma planta. Para favorecer la producción de flores femeninas en C. máxima, y así obtener una mayor producción de semilla hibrida, comúnmente se utilizan hormonas vegetales que promueven la producción de flores femeninas, en detrimento de las masculinas y hermafroditas. Sin embargo, siempre existe un porcentaje de flores hermafroditas y/o masculinas que escapan al tratamiento hormonal y que pueden dar origen a semilla no hibrida, por autofecundación (C. máxima x C. máxima). La empresa Unilever multiplica, comercializa y utiliza ?en producción propia- semillas del cultivar Aconcagua. Conocer el porcentaje de semilla hibrida en cada lote de semillas le permitiría a la Unilever certificar la calidad genética y rotular en el paquete la proporción de semilla hibrida que comercializa. Por solicitud de la empresa Unilever, nuestro grupo de trabajo desarrolló un método de genotipado, mediante análisis de un marcador molecular microsatelite (CMBR22) que permite diferenciar la semilla hibrida de la de ambos parentales, usando ADN de semillas. De esta manera es posible, a partir de una muestra, determinar el porcentaje de individuos híbridos en un lote de semilla. Se ensayaron varios métodos de extracción de ADN a partir de semillas enteras y distintos tejidos de la semilla y se optimizaron las condiciones de PCR para la amplificación y visualización del marcador en geles de agarosa. Como resultado, se puso a punto un método rápido, eficaz y relativamente barato para el genotipado de ambas especies parentales y su hibrido.