Acción de sustancias antioxidantes de subproductos de la industria cervecera en ensayos de cierre de herida en cultivos celulares

SAVINO, N.; VELLA, M; ROLAN OLARTE, M; VILLALBA, I.

Santiago del Estero

Jornada; 10° Jornada de Estudiantes y Jóvenes Investigadores; 2022

FAyA-UNSE

La cerveza es una de las bebidas más populares y consumidas en el mundo. Su producción da lugar a la generación de grandes cantidades de residuos orgánicos. El bagazo cervecero (BSG) es el principal y su descomposición genera un gran impacto sobre el ambiente. Se sabe que es rico en fibras, proteínas y compuestos fenólicos antioxidantes, como el ácido ferúlico (AF) que es uno de los más abundantes. El oviducto de mamíferos es un órgano que provee un óptimo microambiente para el transporte de los gametos, fusión del espermatozoide-ovocito y desarrollo embrionario temprano. Los radicales libres bloquean la motilidad de los gametos e interfieren en la fusión espermatozoide-ovocito. Además, bajos niveles de radicales libres por acción de antioxidantes, promueven la maduración del ovocito, unión del gameto masculino al ovocito y desarrollo temprano del embrión. Se ha determinado en modelos in vitro que el AF puede tener su acción sobre la viabilidad, proliferación y migración mediante ensayos de cierre de herida. Como no se han reportado antecedentes en cultivos celulares de oviducto de mamíferos, se propuso evaluar el efecto del BSG en cultivos de células epiteliales del oviducto bovino. Para ello se realizaron extractos de harina bagazo de cerveza roja secado a 60 y 100ºC mediante doble extracción asistida por ultrasonido, debido a que se determinó previamente que en este tipo de BSG hay mayor contenido de compuestos fenólicos, AF y actividad antioxidante. También se recolectaron oviductos de vaquillonas después de la faena en un frigorífico local y se obtuvieron las células epiteliales mediante presión mecánica. Luego, el pellet celular se resuspendió en un medio de cultivo M199 suplementado con suero fetal bovino 10%, ácido pirúvico 0,2 mM y antibióticos en estufa gasificada a 38,5 °C, con 5% de CO2 y 100% de humedad hasta la obtención de cultivos en monocapa. Posteriormente se adicionó medio sin suero, suplementados con 1% de albúmina sérica bovina durante 2 h y se adicionó 1 mg/ml, 0,5 mg/ml de extractos de harina de BSG de cerveza roja secada a 100° y 60° y además 1,30 y 0,65 µg/ml de AF, cuyas concentraciones fueron determinadas previamente por espectrofotometría en los extractos. Se empleó la técnica de cierre de herida para evaluar la migración y proliferación de las células cultivadas durante 6, 12 y 24 h tomando fotografías en los distintos campos definidos del cultivo, pudiendo evaluar el progreso de las células. El procesamiento de las imágenes se realizó con el programa ImageJ.Los resultados demuestran un efecto significativo al inducir las células durante 24 h con los extractos de BSG y AF sobre la migración de los cultivos comparados con el control. Estos ensayos contribuyen al conocimiento del aprovechamiento de subproductos agroindustriales como fuente de nutrientes y antioxidantes para la posible suplementación de dietas de bovinos evaluando su efecto frente a los mecanismos del estrés oxidativo para poder mantener las condiciones fisiológicas apropiadas en las etapas reproductivas