Evaluación de la técnica PMA-qPCR para detectar y cuantificar Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) viable en hamburguesas de carne vacuna

REY MARÍA DE LOS ÁNGELES; CAP MARIANA; VAUDAGNA SERGIO RAMÓN; MOZGOVOJ MARINA VALERIA

Simposio; Simposio de Nuevas Tecnologías y Herramientas para el Aseguramiento de la Inocuidad y Seguridad Alimentaria; 2021

INTA

IntroducciónEl PMA (propidium monoazide) es un colorante fotoreactivo que se intercala en elADN bacteriano de las células muertas e inhibe su amplificación. Su selectividad sefundamenta en que la membrana bacteriana es impermeable al colorante por lo queeste sólo puede penetrar células cuyas membranas se encuentren comprometidas.Una vez en el interior de la célula, se une al ADN irreversiblemente intercalándoseentre las bases y formando un complejo PMA-ADN por efecto de una etapa defotoactivación con fuente de luz azul LED. En este estado de unión, el ADN no puedeamplificarse por PCR. En muestras con poblaciones mixtas de bacterias (vivas ymuertas o injuriadas) el PMA permitiría la amplificación por qPCR sólo de célulasviables con su membrana intacta.ObjetivoEl objetivo del presente trabajo fue optimizar la metodología PMA-qPCR para evaluarla viabilidad de STEC en hamburguesas de carne vacuna.Materiales y métodosInóculoSe trabajó con la cepa de STEC EDL 933. Una alícuota de inóculo de 8 log UFC/ml secolocó en baño seco a 95 °C durante 10 minutos (muertas) mientras que se conservóotra alícuota sin inactivar (vivas) a la que se le realizó diluciones seriadas.HamburguesasFormulación con 70% carne picada magra, 20% grasa, 2% NaCl, 0,25% tripolifosfatode Sodio y 7,75% agua. Se realizaron homogenatos con las hamburguesas de 10 ginoculadas agregando 90 ml de agua peptona 0,1%.