Comparación de perfiles de restricción de ADN de Salmonella anatum aisladas de embutidos frescos en San Luis, Argentina

FAVIER G.,; LAZARTE OTERO V.,; LUCERO ESTRADA C., ; SALINAS AG.,; ISAGUIRRE A., ; VELAZQUEZ L.

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología VI Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología Micología y Parasitología Clínica; 2010

Asociación Argentina de Microbiología,

COMPARACIÓN DE PERFILES DE RESTRICCIÓN DE ADN DE CEPAS DE Salmonella anatum AISLADAS DE EMBUTIDOS FRESCOS EN SAN LUIS, ARGENTINA. La electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE) es una técnica muy útil y valiosa para la subtipificación molecular de microorganismos. Permite comparar patrones de restricción de ADN y así establecer con mucha precisión las relaciones clonales entre aislamientos de la misma especie bacteriana. El objetivo de este trabajo fue comparar los perfiles de restricción de ADN y determinar la posible relación genética entre cepas de S. anatum aisladas de embutidos frescos destinados al consumo humano. Se utilizó PFGE para la subtipificación de cinco cepas de S.anatum aisladas de 90 chorizos destinados al consumo en la ciudad de San Luis, Argentina. La extracción de ADN cromosomal se realizó según el protocolo estandarizado de PulseNet (Centers for Disease Control and Prevention, CDC, EE.UU.), utilizando la cepa estándar Salmonella braenderup H9812. Las cepas fueron aisladas en agar Mueller Hinton y resuspendidas en buffer TE (10 mM Tris, 1 mM EDTA, pH 8), ajustando la concentración a DO 610: 1,00. Un volumen de 200 μl de cada una de las suspensiones fue mezclado con igual volumen de agarosa Seakem Gold (Cambrex) al 1% (p/v) y colocado en moldes. Una vez formados los moldes de agarosa se incubaron en buffer de lisis (20 mg/ml proteinasa K, 50 mM tris-EDTA, y 1% de lauril sarcosina, pH 8) a 37° C por 18 h. Los moldes fueron lavados cuatro veces con agua ultrapura estéril y buffer TE. Trozos de estos moldes, de aproximadamente 2 mm de espesor, fueron digeridos con 10 U de la enzima de restricción XbaI (Fermentas) durante 2 h a 37°C y sembrados en gel de agarosa para PFGE al 1 % (BioRad) en buffer TBE 0,5 X (45 mM Tris - borato, 1 mM EDTA). La electroforesis se realizó en equipo CHEF DR III (BioRad) a 6 V/cm y 14° C, por 20 h con tiempo de pulso inicial: 2,2 s y tiempo de pulso final: 63,8 s. La tinción del gel fue realizada con Gel Red (Biotium) 3 X en agua ultrapura por 30 min y se visualizó en transiluminador con luz ultravioleta (UVP). Las cepas locales de S. anatum mostraron patrones de restricción idénticos, constituidos por catorce bandas cada uno. La similitud entre los perfiles de restricción de estas cepas sugiere una fuente de contaminación común que podría localizarse en algún punto del proceso de producción: criaderos, frigoríficos, plantas de procesamiento o sitios de comercialización.