ASCLEPAINA CI, UNA ENZIMA PROTEOLÍTICA DE LA PLANTA SUDAMERICANA ASCLEPIAS CURASSAVICA L., CONTRA HELICOBACTER PYLORI

SALINAS IBAÑEZ ANGEL G,; ORIGONE, ANABELLA L.; LIGGIERI, CONSTANZA S.; A. E. VEGA.; BARBERIS, SONIA E.

Santiago de Chile

Jornada; IV Simposio Latinoamerica y biocatalisis y biotransformaciones. III Jornada de Biocatalisis; 2022

Universidad Nacional de Chile

Helicobacter pylori es una bacteria Gram negativa asociada a infecciones gastrointestinales humanas, ampliamente difundida en todo el mundo. Las terapias de erradicación de la bacteria involucran el uso de un inhibidor de la bomba de protones o bismuto y dos antibióticos, en terapias triples o cuádruples según los niveles de resistencia locales. Sin embargo, la erradicación de la bacteria no siempre es exitosa debido a la alta resistencia adquirida a los antibióticos. La Organización Mundial de la Salud determinó que H. pylori está dentro de los 16 microorganismos que representan las mayores amenazas para la salud humana, generando un alto impacto en la salud pública, y alentó la búsqueda de tratamientos alternativos para dichos patógenos. En este contexto, los compuestos bioactivos de algunos productos naturales podrían ser una opción terapéutica relevante contra el patógeno. En este estudio, investigamos el efecto de una enzima proteolítica de los pecíolos y tallos de la planta sudamericana Asclepias curassavica L., denominada asclepaina cI, sobre H. pylori; para su potencial uso como agente terapéutico alternativo a los tratamientos convencionales.Asclepaína cI se aisló y purificó a partir del látex de los tallos y los pecíolos de A. curassavica después de varios pasos cromatográficos1. Se trabajó con la cepa patrón H. pylori NCTC 11638 y 12 cepas aisladas de biopsias de pacientes de San Luis (Argentina). La actividad antibacteriana de asclepaina cI contra H. pylori se evaluó por el método de microdilución en caldo y se determinaron la concentración inhibitoria mínima (CIM) y concentración bactericida mínima (CBM), según las normas estándares del Instituto de Laboratorios Clínicos de EEUU (CLSI)2. Se estudió el efecto de asclepaina cI sobre la viabilidad y la morfología celular, por recuentos de células viables y microscopía óptica y de fluorescencia de los cultivos de H. pylori en presencia y ausencia de una concentración sub inhibitoria (1/2 CIM) de la enzima. Además, se evaluaron los cambios en la transcripción de los genes de virulencia omp18, flaA y ureA con respecto a un gen control (ARNr 16S), utilizando la técnica de RT-PCR. Luego, se analizó el efecto gastroprotector de asclepaina cI sobre el daño inducido por la administración intragástrica de H. pylori en ratones. Las lesiones en el estómago se observaron mediante microscopía. Finalmente, se evaluaron los potenciales efectos hepatotóxicos y nefrotóxicos de asclepaina cI mediante la determinación sérica de aspartato aminotransferasa (AST), alanina aminotransferasa (ALT) y actividad de creatinina. Los resultados del efecto antimicrobiano mostraron un rango de CIM de 1 a 2 μg/mL y CBM de 2 a 4 μg/mL. Los cultivos tratados con asclepaina cI mostraron una disminución significativa en el recuento de células viables con respecto a los cultivos no tratados (p < 0,05). Además, en los cultivos tratados se evidenciaron cambios en la morfología (formas cocoides y cocobacilos). Los niveles de transcripción de los genes omp18, ureA, y flaA disminuyeron significativamente en cultivos tratados (p < 0,05). Los ratones tratados con asclepaina cl previamente a la infección con H, pylori, presentaron una disminución significativa de lesiones con respecto a los ratones sin tratamiento e infectados con H. pylori (p < 0,05). Los niveles séricos de las enzimas hepáticas y renales no mostraron diferencias significativas a las concentraciones estudiadas de asclepaina cI en un modelo animal. Asclepaina cI podría considerarse una alternativa natural a los antibióticos para tratar la infección por H. pylori.