GRANULOSAINA I, UNA PROTEASA AISLADA DE LOS FRUTOS DE SOLANUM GRANULOSO-LEPROSUM (DUNAL) CON EFECTO ANTIMICROBIANO CONTRA HELICOBACTER PYLORI.

SALINAS IBAÑEZ ANGEL G,; D. VALLES; M ADARO; BARBERIS, SONIA E.; ALBA EDITH VEGA

Santiago de Chile

Jornada; IV Simposio Latinoamerica y biocatalisis y biotransformaciones. III Jornada de Biocatalisis; 2022

Universidad Nacional de chile

Helicobacter pylori es una bacteria Gram negativa, helicoidal y microaerófila que coloniza la mucosa gástrica humana, causando infecciones crónicas, gastritis, úlcera péptica, linfomas asociados con el tejido de la mucosa linfoide y cáncer gástrico. El tratamiento de la infección incluye antibióticos e inhibidores de la bomba de protones, pero la creciente resistencia a los antibióticos promueve la investigación de compuestos antibacterianos novedosos, más efectivos y naturales. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto del extracto proteolítico parcialmente purificado (RAP) y la fracción purificada denominada granulosaína I, de los frutos de Solanum granuloso-leprosum (Dunal), una planta nativa de América del Sur, contra H. pylori.El RAP y la fracción purificada de los frutos de S. granuloso-leprosum se obtuvieron según el protocolo descripto por Vallés y col. (2008) (1). Se evaluó la concentración inhibitoria mínima (CIM) y la concentración bactericida mínima (CBM) del RAP y de granulosaina I contra H. pylori NCTC 11638 (cepa de referencia) y 12 cepas aisladas de biopsias de pacientes, usando la técnica de microdilución en placa según las normas estándares del Instituto de Laboratorios Clínicos de EEUU (CLSI) (2). Las concentraciones sub inhibitorias (½ CIM) de los extractos enzimáticos (RAP y granulosaína I) se utilizaron en el estudio de la transcripción de factores patogénicos (omp18, ureA y flaA) por RT-PCR. El amplicón ARNr 16S se utilizó como gen constitutivo. Cuatro antibióticos: amoxicilina (AML, 10 μg), claritromicina (CLA, 15 μg), metronidazol (MTZ, 5 μg) (OxoidTM, Argentina) y levofloxacino (LEV, 5 μg) (Britania, Argentina) fueron evaluados en combinación con los extractos enzimáticos. Ratones BALB/c recibieron dosis (CIM) vía intragástrica de los extractos enzimáticos para evaluar su potencial hepatotoxicidad y nefrotoxicidad mediante la medición sérica de aspartato aminotransferasa (AST), alanina aminotransferasa (ALT) y actividad de creatinina. Todas las cepas bacterianas ensayadas fueron sensibles a granulosaína I con un rango de CIM entre 156,25 y 312,5 μg/mL y CBM de 312,5 a 625 μg/mL; mientras que para el RAP el rango de CIM fue de 312,5 a 625 μg/mL y de CBM de 625 a 1.250 μg/mL. Granulosaina I y RAP disminuyeron significativamente la expresión de genes vinculados a la patogenia de H. pylori: omp18, ureA, y flaA respecto a los controles no tratados. La combinación de antibióticos con los extractos mostró un efecto sinérgico para ambos extractos con AML, CLA y LEV, (p ≤ 0,05) excepto con MTZ. Por otro lado, los extractos no mostraron efectos tóxicos, a las concentraciones estudiadas en un modelo animal. Finalmente, granulosaína I y RAP podrían ser utilizados como adyuvantes para terapias convencionales contra H. pylori.