Obtencion de ADN a Partir de Muestras Oseas Humanas Utilizando Microondas

PLOPER, DIEGO; GUINUDINIK, A; VANNINI, M.V.; NEME TAUIL, R. M.; ROSPIDE, M.A; ABATE, C.M.

San Miguel de Tucuman

Jornada; 3º Jornadas Científicas y Encuentro de Jóvenes Investigadores Augusto Palavecino; 2002

Universidad Nacional de Tucuman

En numerosas ocasiones la determinación de perfiles genéticos es la única herramienta disponible para la identificación de cadáveres o fragmentos de los mismos. Muy a menudo el material cadavérico esta muy deteriorado ya sea por su antigüedad, degradación por animales, insectos y microorganismos, por lo tanto el material a utilizar se limita únicamente a restos óseos y dentarios. Cabe destacar que para la obtención de ADN de calidad analítica, a partir de restos óseos, se requieren cantidades relativamente grandes del mismo ya que el paso previo de decalsificacion reduce significativamente el rendimiento del proceso. En el presente trabajo se plantea como objetivo evaluar los rendimientos de extracción de ADN, a partir de restos óseos, utilizando microondas. Para lo cual se utilizo trabeculas y polvo de hueso humano femoral de distinta data. El ADN fue extraído utilizando EDTA y diferentes tiempos de exposition en microondas a una potencia constante y del 100%. Posteriormente se realizaron tratamientos líticos con proteinasa K y SDS. La solución acuosa fue sujeta a desproteinizaciones con fenol-cloroformo y cloroformo-alc. isoamilico. Posteriormente se concentro el sobrenadante acuoso en tubos centricon 100. El ADN obtenido fue evaluado en geles de agarosa. Mas adelante el ADN fue sujeto a reacciones de amplificación (PCR). Los resultados obtenidos permitieron determinar que: 1) La utilización de microondas incrementa el rendimiento de extracción de ADN. 2) El método desarrollado es mas efectivo sobre trabeculas que sobre polvo oseo. 3) Existe una correlación positiva entre el rendimiento y el tiempo de exposición a microondas.