Diagnóstico molecular de tres mutaciones beta-talasémicas por PCR en Tiempo Real para pacientes hospitalarios de la Red de Laboratorios del Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires

SALIM, JUAN PABLO; SCHEPS, KAREN GABRIELA; PROF. DR. VARELA, VIVIANA; PENNESI, SANDRA P; BASACK, NORA; BAYO HANZA, C; LAFALCE, D; DE PAULA, SILVIA; MERLO, HC; ZERDIEW, ANA

Ciudad de Buenos Aires

Congreso; XXI Congreso Argentino de Hematología; 2013

Sociedad Argentina de Hematología

La beta-talasemia (-tal) es la hemoglobinopatía más frecuente en Argentina. La caracterización molecular de mutaciones, permite establecer el diagnóstico certero y el adecuado asesoramiento genético familiar. La tipificación molecular de 420 familias de Argentina, permitió establecer que las mutaciones más frecuentes son: Codón 39 (40,0 %), IVS-1 nt 110 (19,7 %), IVS-1 nt 1 (11,0 %) e IVS-1 nt 6 (10,8 %).Objetivos: Desarrollar una metodología de diagnóstico molecular por PCR en Tiempo Real para pacientes hospitalarios con sospecha de rasgo -talasémico para las mutaciones Codón 39 e IVS-1 nt 110 por ser las más frecuentes e IVS-1 nt 6, de interesante detección, ya que en más del 50 % de casos analizados previamente, arrojaron valores de Hb A2 normales. Implementar y ofrecer el diagnóstico molecular para los pacientes de los Servicios de Hematología de los hospitales mediante la Red de laboratorios del Gobierno de la Ciudad de Bs. As.Materiales y métodos: Se purificó ADN genómico de leucocitos de sangre periférica de 72 muestras. Se realizó la caracterización molecular de las 3 mutaciones por PCR multiplex en Tiempo Real utilizando sondas TaqMan. Se diseñaron primers y sondas específicas para este ensayo. En una primera etapa, se analizaron 25 muestras controles previamente caracterizadas por PCR e hibridación con sondas alelo-específicas o PCR y secuenciación automática, con genotipos heterocigotas, homocigotas y dobles heterocigotas. En una segunda etapa, se analizaron 37 muestras con indicación de estudio de talasemias con VCM< 80fl y HCM < 27 pg, y 10 muestras con fenotipo compatible con -tal y diagnóstico molecular negativo.Resultados: El análisis de las muestras controles fueron confirmados en un 100 %. Las mutaciones fueron detectadas en 17/37 de los pacientes: Codón 39 (n=8), IVS-1 nt 110 (n=4), IVS-1 nt 6 (n=4); 3 de las 10 muestras con fenotipo de -tal, dieron resultados positivos.Conclusiones: La técnica desarrollada demostró ser robusta y sensible. Su implementación, ofrece una herramienta de screening molecular de -tal para los pacientes de la Red de laboratorios del Gobierno de la Ciudad de Bs. As. y de actualización de su incidencia.