Método analítico para cuantificar fumonisinas totales en maíz

ARANSIBIA, S. P.; GARCIA LONDOÑO, V. A.; PACIN, A. M.; RESNIK, S. L.

Mar del Plata

Congreso; XVI Congreso Argentino de Ciencia y Tecnología de los Alimentos; 2017

AATA

Las fumonisinas son metabolitos tóxicos sintetizados por hongos toxicogénicos, principalmente Fusarium verticillioides y F. proliferatum, en diversas matrices alimenticias, cuando las condiciones del medio ambiente son favorables. Estas se encuentran con frecuencia como contaminantes del maíz destinado a la alimentación de humanos y animales. Varios autores han demostrado la presencia de fumonisinas ocultas. Una de las clasificaciones propone la presencia de fumonisinas libres o extraíbles (FBs) y fumonisinas ocultas las cuales pueden presentarse formando complejos con la matriz, atrapadas físicamente o unidas a macromoléculas mediante enlaces covalentes (llamadas micotoxinas ligadas). Estas micotoxinas ocultas pueden surgir después de la metabolización realizada por plantas, hongos y mamíferos o en la elaboración de alimentos. La suma de las FBs libres y las fumonisinas ocultas se denominan fumonisinas totales FBt. Las metodologías de análisis de las FBt incluyen una digestión ácida o enzimática o una hidrólisis alcalina, seguida de una determinación por cromatografía líquida de alta resolución con detector de fluorescencia (HPLC-FLD) o espectrometría de masas. El objetivo de este trabajo fue desarrollar y validar una metodología analítica para detectar y cuantificar la existencia de fumonisinas B1 y B2 totales en muestras de maíz de Argentina, basada en una hidrólisis alcalina con formación de las FBs hidrolizadas (HFB1 y HFB2), seguida de un análisis por cromatografía líquida de alta resolución con detección por fluorescencia. La puesta a punto de la metodología, se llevó a cabo a través de la optimización de la metodología de extracción estudiando diferentes variables: proporción matriz / KOH 2N (1/10, 1/15 y 1/20), método y tiempo de extracción (Ultraturrax, blender y reposo), tiempo de hidrólisis (50, 100 y 150 minutos) y número de extracciones consecutivas con acetonitrilo después del proceso de hidrólisis. La metodología de extracción optimizada corresponde a una hidrólisis con una relación matriz/KOH 1/10 empleando Ultraturrax a 8000 rpm por un tiempo de 10 minutos, posteriormente un tiempo de hidrólisis de 100 minutos y tres extracciones consecutivas con acetonitrilo. Adicionalmente, se planteó una etapa de extracción líquido - líquido con hexano para la eliminación de interferencias del extracto. El método cromatográfico se basó en la metodología oficial AOAC 995.15 (2000), empleando derivatización pre-columna con orto-ftaldialdehído por HPLC-FLD, una de las técnicas más utilizadas en los laboratorios. Se optimizó una fase móvil en gradiente compuesta por tres solventes (agua:ácido acético (1000 mL + 35 mL); metanol; acetonitrilo, consiguiendo separar las HFBs y FBs. La metodología analítica desarrollada, presentó porcentajes de recuperación superiores al 79%. Los límites de detección y cuantificación para HFB1 fueron de 10 y 30 µg/Kg, y para HFB2 7 y 21 µg/Kg, respectivamente. La metodología fue aplicada en el análisis de 5 muestras de maíz proveniente de la provincia de Buenos Aires con una contaminación de fumonisinas libres de 7602 µg/Kg para FB1 y de 1989 µg/Kg para FB2. La concentración obtenida para HFBs fue en todos los casos superior al contenido de FBs libres, lo cual indica la presencia de fumonisinas ocultas.