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Los cambios en el número de copias de secuencias de ADN suelen estar implicados en la predisposición a enfermedades humanas. Los métodos convencionales basados en PCR y secuenciación de exones individuales no son aplicables para detectar deleciones en un solo alelo, por no ser métodos cuantitativos y quedar enmascarada la mutación por el alelo sano. El método MLPA es una nueva estrategia de cuantificación relativa que permite detectar deleciones o duplicaciones en 40 secuencias de ADN simultáneamente y ha demostrado ser confiable para el diagnóstico de enfermedades genéticas caracterizadas por largas deleciones. El objetivo de nuestro grupo fue poner en funcionamiento la nueva metodología y aplicarla a la detección de portadoras de deleciones en el gen DMD. Este tipo de mutación (65%) es detectado por multiplex PCR en varones afectados, técnica que no es sensible para detectar madres portadoras. Brevemente se partió de 20 ng de ADN, que fueron hibridados con 40 pares adyacentes de sondas distintas, posteriormente ligadas, y amplificadas en conjunto por PCR. Finalmente, los productos fueron analizados por electroforesis capilar en un ABI3100. La metodología se puso a punto con sondas específicas para el cromosoma X e Y, y para cada uno de los exones del gen DMD. Al analizar cuantitativamente los 79 exones del gen DMD, se detectó en una portadora una deleción del exón 47 al 50. En análisis anteriores por PCR multiplex, sólo se había podido detectar en el hijo afectado una deleción del exón 48. La metodología MLPA es de enorme utilidad para detectar portadoras de deleciones en el gen DMD. A su vez es aplicable a varias patologías de origen tumoral, donde las deleciones de uno o más exones cubren más de la mitad de las mutaciones totales.

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