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Un sistema dobre híbrido bacteriano se basa en la complementación funcional de dos fragmentos de una enzima, la cual produce un segunda mensajero necesario para la trasncipción de ciertos genes, como el reportero B-Galactosidasa. Estos fragmentos al ser expresados por separados son no funcionales. Sin emabargo, si son fusionados sus cDNA en un vector, esta unión resulta también en una enzima activa y por lo tanto en la expresión de genes. Nuestra hipótesis es que insertando una secuencia de ADn entre ambos fragmentos, la presencia de un codón stop en esta, daría un solo fragmento no funcional; y en caso de ocurrir un evento de re-iniciación río abajo del codón stop, se obtendrían dos fragmentos, pero separados y por lo tanto tampoco funcionales. Al trasnformar bacterias carentes de esta enzima, se podría medir la presencia de un codón stop en la secuenica insertada por la expresión del gen reportero B-Gal. Nuetsro objetivo fue diseñar y desarrollar este plásmido recombinante y confirmar su reconstitución funcional a través de la observación de distintos fenotipos del reportero B Gal. Para esto se insertó uno de los fragmentos del gen de la enzima (se evita mencionar la enzima por posible patentamiento del método), en marcod e lectura y separado por un MCS, dentro del plasmido que contenia el otro fragmento de la enzima y posteriormente se trasnformaron bacterias carentes de esta enzima endógena. Se obtuvieron colonis de color azul (presenci de X-Gal) en las bacterias trasnformadas, mientras que las células control (sin trasnforma) fueron de color blanco. Concluimos que el plasmido diseñado es funcional y revierte el fenotipo de las bacterias, y de esta manera se plantea su posible uso como herramiento para diagnostico de mutaciones truncantes.

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