Detección de mutaciones en el sitio hot-spot del ret proto-oncogen relacionado con MEN IIA.

ROQUÉ M; PUSIOL E; POTT GODOY C; CASTELLANOS M; MAYORGA LS

MAR DEL PLATA

Congreso; Reunion de Sociedad Argentina de Investigación Clínica SAIC; 2001

SAIC

Introducción: MEN IIA es una enfermedad autosómica dominante. Se caracteriza por el desarrollo de cáncer medular de tiroides (CMT), feocromocitoma e hiperplasia de paratiroides. Mutaciones en el proto-oncogen ret se asocian con MEN IIA. En un 90% de los casos ocurren en el codón 634. Nuestro objetivo fue diseñar una estrategia para detectar mutaciones en este sitio ´hot-spot´. Materiales: se obtuvo ADN de tres pacientes con MEN IIA, cada uno con una base distinta del codón 634 mutada. Se amplificó por PCR el codón 634 mediante cebadores mutagénicos y se incubó con las enzimas BstApI y BglI. Se analizaron los fragmentos en geles de poliacrilamida. Resultados: la estrategia consistió en introducir parte de dos sitios de restricción durante la PCR, que son completados por el codón 634 sano. El sitio para la enzima BstApI es alterado por mutaciones en cualquiera de las tres bases del codón. El segundo sitio para la enzima Bgl I es alterado por cualquier mutación en las dos últimas bases del codón. Una muestra control salvaje fue clivada en su totalidad por la enzima BstApI y las muestras portadoras de una mutación fueron sólo parcialmente cortadas por la misma. En la incubación con la enzima BglI, muestras portadoras de una mutación en la segunda o tercera base del codón fueron sólo parcialmente clivadas. Conclusiones: la estrategia desarrollada permite de manera sencilla chequear (doblemente) la integridad de este sitio ´hot spot´ y detectar casos de CMT hereditario