Fosfatasa alcalina de la diatomea bentónica Halamphora luciae

YASMIN DAGLIO; MATULEWICZ MARÍA CRISTINA; RODRIGUEZ MARÍA CECILIA

Buenos aires

Jornada; X JNCM; 2018

Universidad Nacional de Buenos Aires

Las diatomeas predominan en las comunidades microbentónicas de los estuarios. Siguiendo un ciclo circadiano, en estos ambientes migran desde las capas superiores fóticas a los intersticios inferiores afóticos y ricos en nutrientes orgánicos e inorgánicos durante la noche. De este modo alternan la fijación de carbono fotosintético diurna con la asimilación de nutrientes orgánicos nocturna. La fosfatasa alcalina es una de las enzimas activas en la asimilación mixotrófica de organofosforados. Se evaluó el efecto de la carencia de P sobre la actividad fosfatasa alcalina en cultivos axénicos de la diatomea bentónica Halamphora luciae aislada a partir de sedimentos superficiales del estuario de Bahía Blanca. Los cultivos se sometieron a distintos períodos de hambreado de P: 5, 15 y 25 días. La actividad enzimática en las suspensiones celulares se midió utilizando el sustrato artificial 4-p-nitrofenilfosfato. Para la electroforesis en geles de poliacrilamida 10% (SDS-PAGE) las muestras de los extractos celulares se disolvieron en buffer no reductor. Luego de la electroforesis, la actividad fosfatasa se identificó incubando los geles en buffer Tris HCl pH 9 conteniendo 5-bromo-4-cloro-3-indolilfosfato (BCIP) (0,15 mg ml-1) y azul de nitrotetrazolio (NBT) (0,30 mg ml-1) y MgCl2. La actividad fosfatasa apareció como bandas azules. El período de espera hasta la detección de la actividad enzimática en las suspensiones celulares se acortó concomitantemente con el alargamiento del período previo de hambreado. En los zimogramas, la actividad enzimática apareció asociada a la banda de aproximadamente 62 kDa. Se concluye que la H. luciae responde rápidamente a la carencia de P mediante la activación de la actividad fosfatasa alcalina.