EVALUACIÓN DE LA INFLUENCIA DEL TIEMPO DE EQUILIBRIO ?BACTERIA-GLICEROL? EN LA CRIOCONSERVACIÓN A -20°C

FORNAGUERA, MARÍA JOSÉ; MARTOS, GLADYS IRMA; PEREZ CHAIA, ADRIANA

San Miguel de Tucumán

Jornada; III Jornadas de Microbiología. Sobre Temáticas Específicas del NOA; 2019

Filial NOA-División de Microbiología Agrícola y Ambiental de la Asociación Argentina de Microbiología

La congelación a -20°C es uno de los métodos de conservación transitoria más utilizado y a pesar que los microorganismos han desarrollado mecanismos de adaptación al estrés, durante la congelación se deben adicionar sustancias llamadas crioprotectores (CP) para minimizar los daños causados por la formación de cristales de hielo intracelular, estos se clasifican teniendo en cuenta su permeabilidad en la célula, motivo que explica la necesidad de determinar el tiempo de equilibrio entre el microorganismo y el CP permitiendo su ingreso a la célula para hacer más efectiva la conservación. El objetivo de este trabajo fue evaluar el tiempo óptimo de equilibrio entre la cepa ensayada y Glicerol como CP mediante ciclos de congelamiento. Se utilizó para la evaluación un pellet de la cepa de L. bulgaricus CRL 494 de la Colección de cultivos de CERELA obtenido en condiciones óptimas de crecimiento, se utilizó como medio de suspensión leche extracto de levadura (LEL) adicionado con 10 % (v/v) de Glicerol como CP, los tiempos de equilibrio ensayados fueron 0, 30 y 60 minutos a 4°C, la evaluación de la tolerancia a la conservación se realizó mediante técnica de ciclos de congelamiento, donde la cepa fue sometida luego de 24 h a -20°C a ocho ciclos sucesivos de descongelación durante 5 min a 37°C y congelación durante 1 h -20ºC, posterior al descongelamiento, en cada ciclo se determinó viabilidad celular y se utilizó el método de recuento en placa por microgota en MRS, las placas fueron incubadas a 37ºC hasta desarrollo. Los datos de los resultados obtenidos entre ciclos y viabilidad celular se analizaron por regresión lineal y se aplicó ANOVA para la evaluación estadística, el análisis de regresión muestra que existe una correlación entre ellos y la relación existente es inversamente proporcional, el coeficiente de determinación R2 mostró que cuando el tiempo de equilibrio fue de 0 y 30 minutos la variación en los ciclos afectó aprox. un 85 y 68% la viabilidad celular, sin embargo a los 60 minutos la afectación fue baja obteniéndose solo un 2%, por otro lado los porcentajes de supervivencia luego de ocho ciclos (96, 99 y 99 %) en los tiempos ensayados también mostraron diferencias significativas (P