Desarrollo y validación de tres técnicas de PCR para la detección de Escherichia coli productor de toxina Shiga en carne

BRUSA V; GALLI L; LINARES L; ORTEGA E; LEOTTA G.A

Santa fe

Congreso; III Congreso Bioquímico del Litoral. XVI Jornadas Argentinas de Microbiología; 2015

Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es un patógeno transmitido por alimentos. Las toxinas Shiga se encuentran codificadas en los genes stx. El objetivo del trabajo fue desarrollar y validar 2 SYBR Green-PCR (SYBR-PCR) y 1 Real-Time Multiplex PCR (RT-PCR) para detectar genes stx1 y stx2 en muestras de carne; y comparar estas PCR utilizando carne picada de boca de expendio minorista. Se diseñó un par de primers y una sonda de hidrólisis para cada gen stx. En la RT-PCR se utilizó un control interno de amplificación (CIA). Para la validación intralaboratorio se utilizaron cepas puras y muestras de carne picada contaminadas artificialmente según protocolo AOAC 2012. Ciento tres muestras de carne picada de boca de expendio minorista fueron analizadas por SYBR-PCR y RT-PCR. Todas las muestras stx-positivas fueron confirmadas por aislamiento. Se realizó el análisis estadístico kappa para determinar el nivel de concordancia entre los resultados obtenidos por SYBR-PCR y RT-PCR con el programa Infostat. Los aislamientos de STEC fueron caracterizados por serotipificación y genotipificación (eae, aaiC, aggR y variantes stx). En la etapa de validación intralaboratorio las tres técnicas tuvieron como límite de detección 1x102 UFC mL-1; 100% de inclusividad, exclusividad, sensibilidad y especificidad; y se obtuvieron los mismos resultados al introducir variables en forma deliberada. El nivel de concordancia del análisis de muestras de boca de expendio por SYBR-PCR y RT-PCR fue kappa= 0.758 y 0.801, para stx1 y stx2, respectivamente. El resultado fue estadísticamente significativo (P