Evaluación de medios y condiciones de cultivo para el enriquecimiento y el aislamiento de Escherichia coli productor de toxina Shiga a partir de muestras de carne bovina molida

BRUSA V., ; GALLI L., ; LINARES L.H., ; DELA TORRE J.H., ; ORTEGA E.E., ; ALIVERTI F., ; ALIVERTI V., ; PERAL GARCIA P., ; LEOTTA G.A.

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología. II Congreso de Microbiología Agrícola y Ambiental.; 2013

Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es un patógeno asociado a enfermedades transmitidas por alimentos.En los últimos años se desarrollaron y validaron varios protocolos para su detección y aislamiento orientados a la búsqueda de los serotipos de STEC más virulentos.El objetivo fue evaluar 3 medios y 4 condiciones de cultivo para el enriquecimiento y aislamiento de STEC a partir de carne bovina molida.Se contaminaron experimentalmente 96 porciones de 10 gramos de carne molida libre de STEC, con 12 cepas (10 y 100 UFC) pertenecientes a los serotipos considerados más virulentos: O26:H11, O111:NM, O157:H7, O91:H21, O145:NM, O103:H25, O8:H2, O112:H2, O121:H19, O130:H21, O178:H19 y O113:H21.Las muestras fueron enriquecidas según los protocolos descriptos en las normas ISO/TS 13136:2011, USDA MLG 5B.03, BAM Chapter 4A y con caldo Escherichia coli modificado (ECm) incubado 18h a 42°C.Se realizó extracción de ADN de los caldos de enriquecimiento por ebullición en buffer tritón.Como tamizaje se utilizó la PCR MK.De cada muestra positiva para los genes stx se tomaron 3 alícuotas de 1 ml del caldo y se sembraron por agotamiento en 3 placas de agar EMB Levine, 3 de agar MacConkey (MC) y 3 de agar TBX.Las placas fueron incubadas a 37ºC durante 18h.A partir del área de crecimiento confluente, se realizó la detección de los genes stx por PCR múltiple, con excepción de las placas de EMB de las cuales se picaron 50 colonias a ciegas en MC.De las placas cuyas confluencias fueron positivas para los genes stx, se repicaron 50 colonias en una placa grillada de MC.Posteriormente, se analizaron las colonias de los pooles positivos en forma individual.La capacidad discriminatoria, especificidad y el valor predictivo positivo fue 1 para todas las técnicas utilizadas con ambos inóculos.Cuando éste fue de 100 UFC, los valores de precisión (Pr), sensibilidad (Se) y valor predictivo negativo (VPN) fueron 1 para la metodología de enriquecimiento USDA con cualquiera de los 3 agares utilizados para el aislamiento, mientras que cuando el inóculo fue de 10 UFC los mismos parámetros tomaron valor 0.92, 0.91 y 0.50 cuando se utilizó agar MC; y 0.84, 0.83 y 0.33 cuando se aisló en agar EMB y TBX.La metodología de enriquecimiento con caldo ECm y aislamiento en TBX obtuvo un valor de Pr igual a 0.92, de Se 0.91 y un VPN de 0.50 con ambos inóculos.El resto de las metodologías obtuvieron valores de Pr menores a 0.84, de Se menores a 0.83 y VPN menores a 0.30. La combinación del protocolo de enriquecimiento USDA seguida de la siembra en MC resultó ser la más eficiente para el aislamiento STEC.En los últimos años se desarrollaron varias técnicas para la detección de STEC en alimentos, pero su aislamiento continúa siendo un desafío. La baja carga inicial del microorganismo en las muestras, la diversidad genética y bioquímica de STEC no-O157,y la ausencia de un marcador fenotípico único que la diferencie de otras bacterias presentes en la carne dificulta más aún su aislamiento.