Análisis de Glicosilación de Macromoléculas

MARIÑO, KARINA V.; ALEJANDRO J. CAGNONI

2018-01-01

2024-02-01

Prom.Gral.del Conoc.-Cs.Exactas y Naturales

Debido a su complejo proceso de biosíntesis los glicoconjugados son naturalmente heterogéneos, generando diferentes ?glicoformas? específicas, que proveen dinamismo en procesos celulares como el de desarrollo, activación, migración o diferenciación celular. En los últimos años se han logrado importantes avances en el campo de la glicoanalítica, que permiten no sólo el estudio detallado de las modificaciones post-traduccionales de proteínas (N- y O-glicanos de membrana celular, de suero y glicanos libres en otros fluidos corporales) y es de utilidad en varias disciplinas biomédicas.La glicoanalítica hoy en día cuenta con varias tecnologías disponibles: la caracterización de glicanos derivatizados (fluorescentes) por cromatografía liquida de interacción hidrofílica (HPLC/UPLC-HILIC) permite la caracterización detallada de las estructuras presentes en una muestra determinada. Esta es una de las técnicas más sensibles para la caracterización estructural de posibles cambios en los perfiles de glicosilación, detectando glicanos en el orden de femtomoles, y se basa en la liberación enzimática y/o química de los glicanos y su posterior marcación fluorescente. Este proceso ha sido optimizado para procesamiento de muestras de N- y también O-glicanos con alta eficiencia y es aplicable a gran número de muestras, adaptado en formato de placas de 96 pocillos. Tambien hemos optimizado dos métodos cromatografico para la detección del porcentaje de silalilacion de la muestra y su especiacion, ambos parámetros biológicamente importantes. Y finalmente, la determinación de monosacáridos presentes en la muestra.