PEQUEÑAS DELECIONES E INSERCIONES EN EL GEN DEL FACTOR VIII CAUSALES DE HEMOFILIA A SEVERA: 9 MUTACIONES NO REPORTADAS

ROSSETTI LC, RADIC P, LARRIPA IB, DE BRASI CD

Mar del Plata, Argentina.

Congreso; XLIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2004

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

En hemofilia A (HA) el análisis directo de la mutación causal en el gen del factor VIII (F8) constituye la ruta ideal para la provisión de asesoramiento genético. El objetivo de este trabajo es identificar y analizar los efectos de las mutaciones Ins/Del en familias con HA severa (HAs). Se estudiaron muestras de probandos de 30 familias con HAs y negativas para las grandes inversiones y deleciones de F8. Primero, se amplificaron por PCR las regiones génicas codificantes (35 amplímeros), luego se aplicó la técnica de Conformation Sensitive Gel Electrophoresis (CSGE), con subsecuente secuenciación del segmento señalado. Mediante estudios de predicción bioinformática utilizando el programa nnpredict se analizaron las potenciales consecuencias en la estructura secundaria del F8 mutado en los 2 cambios In-Frame caracterizados. En un total de 65 familias con HAs se detectaron 12 mutaciones específicas de familia, 3 recurrentes y 9 nuevas. Tres correspondieron a pequeñas inserciones (Ins) ninguna de ellas previamente reportada: c.435insTTT (p.D145_K146insF) In-Frame; c.5592insA Frameshift +1 (A-run); y c.3500insA Frameshift +1 (A-run); y 9 resultaron pequeñas deleciones (Del): c.208_211delTTTG Frameshift –4; c.6049delG Frameshift –1; c. 2014_2016delTTC (p.F672del) In-Frame ya reportadas; y c.3756delG Frameshift –1; c.6919_6920delGA Frameshift –2; c.5689_5690delCT Frameshift –2; c.4388_4391delCTTT Frameshift –4; c.1409delC Frameshift –1; y c.2490delC Frameshift –1 (No A-run); aún no reportadas. En 4/13 (30%) casos con Ins/Del se detectó anticuerpo inhibidor. Los datos de frecuencia y riesgo relativo de inhibidor asociados a Ins/Del resultan similares a los reportados en la literatura. El estudio bioinformático permitió predecir cambios en la estructura secundaria del F8 que determinarían el fenotipo severo asociado a las Ins/Del In-Frame. El abordaje presentado permite la provisión de información segura y directa para asesoramiento genético en familias con HA severa.