SI-PCR PARA LA INVERSIÓN DEL INTRÓN 1. NUEVO MÉTODO PARA DETECTAR EL SEGUNDO DEFECTO RECURRENTE EN HEMOFILIA.

RADIC P, ROSSETTI L, CANDELA M, PÉREZ BIANCO R, DE TEZANOS PINTO M, LARRIPA I, DE BRASI CD.

Salta, Argentina.

Congreso; XVIII Congreso de la Sociedad Argentina de Hematología (SAH).; 2007

Sociedad Argentina de Hematología (SAH).

Casi la mitad de las hemofilias A (HA) severas son causadas por grandes inversiones recurrentes en el intrón 22 (Inv22) y el intrón 1 (Inv1) que truncan e inactivan completamente al gen del factor VIII (F8). La Inv22 e Inv1 son originadas por eventos de recombinación homóloga entre secuencias repetidas e invertidas (int22h e int1h, respectivamente) intra-X, en meiosis masculinas. Los objetivos de este trabajo fueron desarrollar y validar un nuevo método de análisis de la Inv1 y estimar la frecuencia de la Inv1 en familias Argentinas con HA-severa. Recientemente hemos desarrollado un nuevo abordaje para investigar la Inv22, shifting inverse-PCR (SI-PCR). La técnica de SI-PCR para la Inv22 incluye la obtención de círculos-BclI, a partir de ADN genómico (restricción con BclI y autoligación) para cada probando con HA-severa. Este sustrato puede ser utilizado en un ensayo PCR independiente para detectar la Inv1 (primers 1IU, 1ID, 1ED) con señales de 304 y 224 bp para los alelos normal e Inv1, respectivamente. La validación de la técnica de SI-PCR para la Inv1 se realizó por comparación y perfecta concordancia de resultados obtenidos en doble ciego entre el método convencional, doble-PCR y SI-PCR en 21 individuos. En 105 familias Argentinas con HA-severa se encontró la Inv1 en probandos de 2 familias (2%). En éstas familias, se estudiaron 2 hermanas del probando y sólo una resultó portadora. Los 2 pacientes Inv1 positivos no desarrollaron inhibidores neutralizantes de la terapia sustitutiva.