DETECCIÓN DE GRANDES DELECIONES HETEROCIGOTAS POR QRT-PCR: DIAGNÓSTICO DE PORTADORAS EN HEMOFILIA

ABELLEYRO MM; TETZLAFF T; ROSSETTI LC; RADIC CP; LARRIPA IB; DE BRASI C

Rosario

Congreso; XV Congreso Latinoamericano de Genética (ALAG); 2012

Según distintas series internacionales, el 5-15% de los pacientes con hemofilia A (HA) severa presenta grandes deleciones (GD) (>100pb) del gen del factor VIII (F8). La detección molecular heterocigota de GD para diagnóstico de portadoras de HA está dificultada por la presencia del alelo no-mutado. Para abordar el diagnóstico heterocigota de GD en HA, se desarrolló y validó un método basado en medición relativa de dosis génica mediante QRT-PCR (PCR cuantitativa en Tiempo-Real), entre una región específica (Xq28-F8) involucrada (T) (sobre el Promotor y el exón 26) y una región referencia (2q33-CTLA4) no involucrada (R). Como poblaciones control de simple dosis (T/R=1/2) y doble dosis (T/R=2/2), se utilizaron varones (46;XY) (V) y mujeres (46;XX) (M) de la población general, respectivamente. La distribución de dosis T/R en las poblaciones control V (N=15) y M (N=15) permitió ajustar curvas de Gauss que no mostraron solapamiento. La interpolación de los valores T/R de las mujeres familiares en riesgo (eventuales portadoras) en estas curvas permitió su caracterización como portadoras o no portadoras. Cuatro familias con HA severa fueron analizadas: dos familias con GDs que involucran al exón 26 (Δ26) (2/4 mujeres familiares resultaron portadoras) y dos familias con deleciones que involucran al promotor del F8 (ΔP) (3/4 mujeres familiares resultaron portadoras). Conclusión: el método basado en QRT-PCR permite clasificar portadoras heterocigotas de GDs causales de HA.