INVERSIÓN DEL INTRÓN 22 VARIANTE ASOCIADA A UN NUCLEÓTIDO POLIMÓRFICO EN FAMILIAS CON HEMOFILIA A SEVERA.

ABELLEYRO MM; ROSSETTI LC; RADIC CP; CANDELA M; LARRIPA IB; DE BRASI CD

Congreso; XL Congreso de la Sociedad Argentina de Genética (SAG); 2011

La inversión del intrón 22 (Inv22) es un rearreglo recurrente del gen del factor VIII (F8) que causa la mitad de las hemofilias A (HA) severas sin diferencias étnico-geográficas. La Inv22, generada por interacción meiótica entre duplicones, puede presentarse en dos patrones de restricción BclI (tipo-I y -II) según cuál copia externa al F8 esté involucrada. La aplicación del abordaje de inverse shifting-PCR (IS-PCR) en nuestra serie, incluyendo dos análisis (diagnóstico y complementario), permitió detectar tres pacientes con HA-severa de dos familias relacionadas (tatarabuela común), con patrones compatibles con la Inv22 tipo-I en el análisis complementario y ausencia de señales en el diagnóstico. Para explicar estos patrones IS-PCR inusuales, se realizaron experimentos para estudiar eventuales defectos por: mutación en los sitios BclI terminales; en las regiones de unión de los primers; y por inversiones adicionales en  algún extremo del fragmento. Los resultados permitieron descartar estas tres hipótesis. Una cuarta hipótesis consistió en suponer la aparición de un sitio BclI que rompiera la integridad del fragmento ausente en el análisis diagnóstico asociado a una base polimórfica. Por estudios in-silico, con introducción de los alelos variante de 85 SNPs anotados en el fragmento involucrado y nuevo mapeo BclI, se seleccionó el SNP:rs73563631 [A/G] como un posible responsable del patrón IS-PCR anómalo. Estudios directos por PCR-restricción BclI e IS-PCR con primers específicos del sitio BclI polimórfico permitieron confirmar la hipótesis planteada. Estos resultados muestran un nuevo patrón de la Inv22 derivado del tipo-I asociado a un nucleótido polimórfico, NC_000023.10:g.154108863A>G, en pacientes con HA-severa.