Validación de la técnica de Dot blot para la detección precoz del fitopatógeno Cercospora kikuchii en plantas de soja.

PERETTI CANALE, M.V.; MATTIO, M.C.; MAUMARY, R.; LATORRE RAPELA, M.G.

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología. XIV Congreso Argentino de Microbiologia. IV Congreso Latinoamericano de Microbiologia de Medicamentos ? CLAMME. Reunión de la Sociedad Latinoamericana de Tuberculosis y otras Micobacteriosis (SLAMTB).; 2016

Asociación Argentina de Microbiología y Asociación Latinoamericana de Microbiología

En Argentina, el tizón de la hoja y la mancha púrpura de la semilla cuyo agente causal es Cercospora kikuchii ocasiona la reducción del valor nutricional de la planta y provoca severo deterioro de las cosechas. La cercosporina, una toxina específica de este género, es responsable de provocar la enfermedad. La proteína CFP (?Cercosporin Facilitator Protein?) regula su producción y la exporta hacia el exterior del hongo. Para el manejo apropiado de una enfermedad es importante la identificación precoz y correcta del fitopatógeno, lo que permite evitar el uso desmedido de plaguicidas e iniciar un tratamiento adecuado. La técnica de Dot blot es rápida, económica y de fácil ejecución, utiliza papel de nitrocelulosa como soporte sólido y genera un precipitado coloreado insoluble que permite una lectura visual de la reacción. La validación de esta técnica garantiza la fiabilidad del resultado.El objetivo de este trabajo fue validar la técnica de Dot blot para la detección de C. kikuchii en plantas de soja, mediante la determinación de la presencia de la proteína CFP. Los principales criterios de validación analizados fueron sensibilidad (DSe) y especificidad (DSp) diagnóstica, eficacia (E) y valores predictivos positivos (VPP) y negativos (VPN).Se trabajó con los extractos solubles de 30 plantas positivas (inoculadas experimentalmente con C. kikuchii NBRC 6711) y 30 plantas sanas, para una DSe y DSp estimada del 98% con una confianza deseada del 95% y un error permitido del 5%, con C. kikuchii NBCR 6711 como control positivo; y Penicillium sp. y Alternaria sp. como controles negativos. Se definió una línea de corte a través de la curva ROC utilizando el programa MedCalc. Se consideró un score < 2 para las plantas sanas (ausencia de CFP en el tejido foliar) y ≥ a 4 para las plantas con sintomatología del tizón por Cercospora. El ?score? se determinó teniendo en cuenta la cantidad e intensidad de las manchas sobre la membrana de nitrocelulosa. Para el análisis estadístico de los resultados se utilizó una tabla de contingencia que contempla los resultados verdaderos positivos (VP), falsos positivos (FP), verdaderos negativos (VN) y falsos negativos (FN) y se calcularon los parámetros de validación: sensibilidad diagnóstica (DSe=VP/(VP+FN)), especificidad diagnóstica (DSp=VN/(VN+FP)), eficacia (E=VP+VN/ VP+VN+FP+FN), valor predictivo positivo (VPP=VP/(VP+FP)) y valor predictivo negativo (VPN=VN/(VN+FN)).La técnica de Dot blot presentó una sensibilidad diagnóstica de 93,3% (IC95%= 84,4-100) y una especificidad diagnóstica de 96,7% (IC95%= 90,3-100). La eficacia fue de 95,0% y los valores predictivos positivos y negativos de 96,6 % y 93,5% respectivamente.En base a los valores obtenidos, se puede concluir que la técnica de Dot blot presentada ofrece resultados positivos y negativos que permiten confirmar o descartar la presencia del patógeno Cercospora con un elevado nivel de confianza, brindando una herramienta útil para su detección precoz.