Síntesis de surfactina, bacteriocina y compuestos antifúngicos por cepas de Bacillus sp. aisladas de miel y abeja

SABATÉ, DANIELA C.; CARRILLO, LEONOR; AUDISIO, M. CARINA

Buenos Aires, Argentina

Congreso; XI Congreso Argentino de Ciencia y Tecnología de Alimentos (CYTAL); 2007

Síntesis de surfactina, bacteriocina y compuestos antifúngicos por cepas de Bacillus sp. aisladas de miel y abeja Las bacterias del género Bacillus han sido citadas en numerosos trabajos como antagonistas o productores de diversos antibióticos o metabolitos con actividad frente a bacterias, mohos y tripanosomas. En los últimos años ha habido un considerable interés en el uso de Bacillus sp. productores de sustancias antimicrobianas, como bacteriocinas y biosurfactantes para ser usados como agentes de biocontrol debido a sus actividades antagónicas sobre microorganismos patógenos además del menor impacto ambiental por su origen biológico y mayor velocidad de producción. El objetivo de este trabajo fue analizar la producción por estas bacterias de metabolitos con actividad inhibitoria frente a patógenos no sólo para el hombre, como Listeria monocytogenes, sino también para la abeja melífera como Paeinbacillus larvae y Ascosphaera apis. De muestras de miel y abejas de distintas localidades del noroeste argentino se aislaron y seleccionaron en nuestro laboratorio cinco cepas pertenecientes al género Bacillus; la selección se basó en el efecto inhibitorio sobre L. monocytogenes, P. larvae y A. apis. Los aislados se inocularon en medio BHI durante 24 h a 37ºC. La actividad antimicrobiana, tanto de las suspensiones celulares como de los sobrenadantes libres de células (SLC), fue analizada por el método de difusión en placa. La naturaleza fisicoquímica de las sustancias inhibitorias fue analizada para determinar la producción de lipopéptidos y/o bacteriocinas. La síntesis de lipopéptidos se analizó en los SLC luego de su precipitación con HCl y posterior recuperación con metanol. En dichas fracciones se determinó la presencia de surfactina por HPLC, empleando surfactina patrón comercial. La producción de bacteriocinas se estudió en el SLC por precipitación con sulfato de amonio en diferentes porcentajes de saturación y posterior electroforesis en SDS-PAGE. Tanto las células y el SLC de las cepas presentaron actividad frente a L. monocytgenes y P. larvae cuando fueron incubadas 24h en BHI. Sin embargo, cuando se utilizó A. apis como cepa indicadora, esta fue inhibida solamente por el cultivo celular y no por el SLC. Las cinco cepas de Bacillus estudiadas mostraron síntesis de surfactina, ya que el perfil cromatográfico de los distintos metabolitos recuperados fue idéntico al patrón. Por otro lado, las fracciones obtenidas luego de la precipitación con sulfato de amonio, analizadas por SDS-PAGE y reveladas según su actividad biológica, mostraron diferentes bandas con actividad anti-listeria para cuatro de las cinco cepas de Bacillus sp.; esto indicaría la síntesis de compuestos tipo bacteriocina. Los resultados obtenidos muestran que las cepas de Bacillus sp. aisladas de miel y de abejas inhiben a patógenos importantes tanto para el hombre como para la abeja. L. monocytogenes se vio inhibida por surfactina y por algún compuesto tipo bacteriocina, mientras que P. larvae sólo fue afectado por surfactina. La actividad antifúngica se observó sólo en las suspensiones celulares, lo que indicaría que el/los compuestos quedarían retenidos en la célula.