Caracterización estructural de surfactinas, iturinas y fengicinas producidas por cepas de Bacillus spp. Con actividad anti Escherichia coli utilizando MALDI MS/MS

PETROSELLI, GABRIELA; HUARACHI, SERGIO; AUDISIO, M. CARINA; ERRA-BALSELLS, ROSA

Congreso; IV Congreso Argentino de Espectrometría de Masas.; 2022

Las bacterias del género Bacillus producen metabolitos con actividad biológica, destacándoseenzimas, antibióticos y lipopéptidos. Los lipopéptidos son péptidos cíclicos que se clasifican deacuerdo a la longitud y composición de su cadena peptídica como surfactinas, iturinas, fengicinas,entre otras familias. En este trabajo se describen los lipopéptidos producidos por las cepasBacillus subtilis subsp. subtilis C4 y Bacillus amyloliquefaciens B31aisladas de miel y de desechosde una curtiembre artesanal, respectivamente. Estas cepas resultaron de interés por teneractividad inhibitoria frente a cepas de Escherichia coli enteropatógenas de origen clínico. Elobjetivo del trabajo fue la obtención de perfiles (huellas dactilares) de la mezcla de lipopéptidos yel estudio de la fragmentación de homólogos sobre las mismas muestras.Las cepas B. subtilis subsp. subtilis C4 y B. amyloliquefaciens B31se incubaron en medio LuriaBertani durante 6 días a 37 ºC sin agitación. Las muestras analizadas por espectrometría de masaUV MALDI fueron los sobrenadantes libre de células (SLC) y las fracciones de lipopéptidos (FL).Estos últimos fueron obtenidos a partir del SLC por precipitación ácida y posterior extracción consolvente (metanol). Los espectros se obtuvieron en modo de detección iónico positivo utilizandonorharmano como matriz. La asignación de la estructura fue realizada a partir de los pesosmoleculares y de la correspondiente fragmentación observada (UV-MALDI-MS/MS; modo LIFT). Elconjunto de señales observadas en los espectros MS/MS se asignó considerando que ensimultáneo ocurrieron dos tipos de fragmentaciones diferentes. Adicionalmente para la asignaciónde los diferentes homólogos, se utilizó información disponible en bibliografía para otras cepas deBacillus. 1-3A partir de los espectros MS obtenidos se concluyó que ambas cepas producen mayoritariamentehomólogos de surfactinas, pero que se diferencian en el número y la intensidad relativa delipopéptidos pertenecientes a las familias de kurstakinas, iturinas y fengicinas. Los espectrosMS/MS fueron fundamentales para realizar la asignación de ciertos homólogos producidos porB31 y C4, demostrando que las cepas estudiadas producen diferentes isoformas pertenecientes ala familia de iturina que fueron detectados a igual valor de m/z (B. amyloliquefaciens B31 produceC16-bacillomicina D mientras B. subtilis subsp. subtilis C4 produce C15-iturina C).