Estudios de propiedades biotecnológicas de Ligilactobacillus salivarius subsp. salivarius A3iob

ALCOCER, JIMENA; MEZA, JAIRO; SALFITY, J. ADRIÁN; AUDISIO, M. CARINA

Congreso; VIII Congreso Internacional de Ciencia y Tecnología de Alimentos; 2022

Ligilactobacillus salivarius, anteriormente clasificado como Lactobacillus salivarius, es una bacteria Gram-positiva con potencial probiótico para el ser humano y para animales. En este trabajo se evaluó el potencial de Lig. salivarius subsp. salivarius A3iob, cepa con propiedades probióticas para la abeja melífera, para sintetizar ácido láctico en medio MRS, comercial (MRSc), y preparado ingrediente por ingrediente (MRS iXi) en el laboratorio, y su espectro antimicrobiano frente a diferentes bacterias productoras de enfermedades transmitidas por alimentos. Para ello, de cultivos de A3iob preparados en MRS y en MRS ixi e incubados a 37ºC en condiciones de microaerofilia y sin agitación, luego de 12 y 24 h de crecimiento se recuperaron los sobrenadantes libres de células (SLC) por centrifugación. En estos SLC se procedió a la determinación del ácido láctico según el método colorimétrico de Barker y Summerson, con las siguientes modificaciones: se empleó dimetilformamida como solvente del p-fenilfenol y se realizó una incubación a 50 °C luego de agregar los reactivos cromogénicos. Por otro lado, se evaluó la actividad inhibitoria frente a Listeria monocytogenes, Bacillus cereus y Staphylococcus aureus por la técnica de difusión en agar. Se sembraron 25 µL de SLC de MRSc y MRSi, en pocillos de 5 mm de diámetro en placas con agar Muller Hinton inoculadas con 75 µL de las cepas indicadoras; las placas se incubaron a 37°C durante 24h y se evaluó la presencia/ ausencia de halos de inhibición. Se decidió además evaluar la sobrevida de S. aureus 172 según la técnica de contacto directo; para ello en una microplaca de 96 pocillos se pusieron en contacto, (relación 1/10, 37ºC) el SLC de MRS ixi a pH ácido y a pH neutro con una suspensión de la cepa indicadora (ca. 106 ufc/mL), de cultivos de 24 h crecidos en caldo BHI. Ligilactobacillus salivarius A3iob sintetizó 195 mM y 211 mM en MRSc y en ixi, respectivamente, luego de 24 h de incubación a 37ºC y en condiciones de microaerofilia. Cuando se analizó la actividad antimicrobiana por la técnica de difusión en agar, ambos SLC presentaron resultados similares, inhibieron las cepas de Listeria, E. avium y S. aureus 298; mientras que se observó diferencia cuando se analizó el efecto sobre S. aureus. Las cepas más sensibles para el SLC de MRSc fueron S. aureus 239, ATCC 26698 y 271. Mientras que para el SLC ixi fue S. aureus 172. Al realizar contacto directo entre el SLC ixi y S. aureus 172, se observó que el SLC a pH ácido exhibió la mayor inhibición luego de 24h, con una disminución de 2 órdenes logarítmicos desde el inicio (ca. 6 log ufc/mL). Mientras que para el control (caldo BHI) y SLC a pH neutro se mantuvo en valores entre 7 y 8 log ufc/mL. Se concluye que Lig. salivarius A3iob presentó mayor producción de ácido láctico en medio MRS ixi; que éste metabolito fue el principal agente antimicrobiano y que el efecto anti-S. aureus fue cepa dependiente.