Caracterizacion Genética De Bacteriocinas De Enterococos Aislados De Diferentes Orígenes

 SAAVEDRA M.L., FONTANA C; MINAHK C*; RUIZ HOLGADO A., VIGNOLO G., AUDISIO C. Y SESMA F

,Bs.As

Congreso; IX Congreso Argentino de Microbiología; 2001

Asociacion Argentina de Microbiologia

Algunos microorganismos pertenecientes al género Enterococcus juegan un rol preponderante en la elaboración de productos artesanales, ya que no solo contribuyen al desarrollo de características organolépticas típicas sino también presentan una acción biopreservante debido en parte a la producción de bacteriocinas (enterocinas). Generalmente las enterocinas se encuentran clasificadas dentro del grupo II que corresponden a bacteriocinas pequeñas, estables al calor y algunas de ellas activas frente a patógenos alimentarios como Listeria sp. La posibilidad de desarrollar fermentos lácticos de “grado alimentario” con una alta capacidad de producción de bacteriocinas para las industrias alimenticias y/o farmacéuticas sería una meta interesante a conseguir. El objetivo de este trabajo fue evaluar y caracterizar la presencia de genes estructurales de enterocinas en cepas aisladas de diferentes orígenes. Se trabajó con 3 cepas pertenecientes a la colección de cultivos de CERELA, E. mundtii CRL10 aislada de queso artesanal, E. faecium CRL1385 aislada de buche de pollo y E. faecium CRL988 (ATCC 19434), las cuales fueron seleccionadas debido a su actividad inhibitoria frente a L. monocytogenes y L. innocua. Se analizó el contenido plasmídico de las mismas y se determinó que CRL 10 poseía un único plásmido de alrededor de 30 kb (pCRL10-1), mientras que CRL1385 y CRL988 eran cepas libres de plásmidos. A partir de ADN total  y de ADN plásmidico se trató de amplificar mediante PCR, a los genes estructurales de enterocinas conocidas,  usando para ello primers específicos para enterocina A, enterocina B y enterocinas L50 A y B. Para las cepas CRL1385 y CRL988 se amplificaron fragmentos con los tamaños espe­rados para los genes  estrucurales de enterocina A y enterocina B (130 bp y 160 bp, respectivamente). Los amplicones fueron secuenciados y las secuen­cias nucleotídicas fueron analizadas y comparadas con secuencias dispo­nibles en GenBank, confirmándose que estas presentaban una alta homología con las secuencias correspondientes a enterocina A (AF240561) y a enterocina B (U87997). No se obtuvieron resultados cuando se usaron primers correspondientes a los genes estructurales de las enterocinas L50 A y B. Para la cepa CRL10 no se obtuvieron resultados positivos con ninguno de los primers empleados, lo que indicaría que esta cepa produce una bacte­riocina diferente. El péptido antimicrobiano fue purificado; se determinó su PM (1940 Da, MALDITOF) y se procedió a determinar la secuen­cia NH2-terminal del mismo. En base a los resultados obtenidos, se diseñaron primers degenerados para localizar los genes involucrados en las síntesis y maduración de enterocina CRL10.