REPOSICIONAMIENTO DE BLANCOS MOLECULARES COMO ESTRATEGIA PARA LA BÚSQUEDA DE NUEVOS AGENTES TERAPÉUTICOS CONTRA LA TOXOPLASMOSIS

LUCAS N. ALBERCA; ROQUE DIETRICH; FRANCO N. CARAM ROMERO; AGUSTINA GANUZA; LUCIANA GAVERNET; MARÍA CORVI; ALAN TALEVI

Buenos Aires

Congreso; XXXII Congreso Argentino de Química; 2019

Asociación Química Argentina

La toxoplasmosis es una enfermedad infecciosa causada por el parásito protozoario Toxoplasma gondii. La infección puede contraerse a través de la ingesta de carne cruda o poco cocida, leche sin pasteurizar, transplante de órganos, transfusión de sangre, por transmisión vertical, por contacto directo con las heces de felinos infectados o incluso por ingesta de oocistos esporulados en agua o comida [1]. El reposicionamiento de blancos moleculares (target repurposing) implica evaluar compuestos con probada actividad sobre determinado blanco molecular (humano o no) en ortólogos de otra especie [2, 3]. Esta aproximación ha despertado particular interés en el campo de las enfermedades infecciosas y, en particular, de las enfermedades desatendidas.Recientemente reportamos la actividad tripanocida de cisaprida (proquinético),cinarizina (anti-cinetosis) y paroxetina (antidepresivo), verificando que estas tres drogas inhiben la captación de putrescina en Trypanosoma cruzi [4-6]. Considerando que T. gondii es auxótrofo para poliaminas [7], en el presente trabajo evaluamos el efecto de estos compuestos en el agente etiológico de la toxoplasmosis. Para la puesta a punto del ensayo de citotoxicidad de las drogas sobre las células hospedadoras, se incubaron fibroblastos humanos (células hTERT) en placas de 96 pocillos durante 24 hs y luego se cambió el medio con otro conteniendo las distintas drogas en las siguientes concentraciones: 0 (DMSO); 195 nM; 390 nM; 781 nM; 1,562 μM; 3,125 μM; 6,25 μM; 12,5 μM; 25 μM y 50 μM. Las células se incubaron durante 96 hs en condiciones estándares de cultivo y la citotoxicidad se determinó mediante reducción del bromuro de 3 (4,5 dimetil-2-tiazoil)-2,5-difeniltetrazólico (MTT),leyéndose la absorbancia a 570 nm.Para el ensayo con parásitos, se crecieron fibroblastos en placas de 96 pocillosdurante 24 hs y luego se agregaron 4.000 parásitos fluorescentes (expresan laproteína fluorescente roja) por pocillo. Luego de 4 hs, se incubaron los parásitos en presencia de las drogas (0 (DMSO); 195 nM; 390 nM; 781 nM; 1,562 μM; 3,125 μM y 6,25 μM) durante 4 días en condiciones estándar de cultivo y 96 hs post-infección se midieron los valores de fluorescencia (excitación 544 nm y emisión 590 nm) desde abajo de la placa utilizando un lector de placas BioTek Synergy. Los datos se expresaron como porcentaje de fluorescencia respecto del control con DMSO (100% fluorescencia) y se analizaron utilizando el software GraphPad Prism 6.0. En el caso de cinarizina, no fue posible observar un efecto sobre T. gondii dependiente de la concentración a las concentraciones ensayadas. No obstante, se observó un efecto antitoxoplasmático concentración-dependiente tanto para cisaprida (IC50 = 5,9 μM, Intervalo de confianza 95%: 2,986 - 11,75 μM) como para paroxetina (IC50 = 2,4 μM, Intervalo de confianza 95%: 1,784 - 3,281 μM). En el caso de paroxetina, se estimó un índice de selectividad (con respecto a la célula hospedadora) similar a 5, mientras que en el caso de cisaprida el índice de selectividad estimado fue >8 (ausencia de efecto citotóxico significativo en la célula hospedadora a concentración 50 μM).