Comparación de distintas técnicas para la detección de cepas de Y. enterocolitica desde alimentos cárnicos obtenidos en comercios de la ciudad de San Luis

LUCERO ESTRADA CECILIA STELLA MARYS; VELÁZQUEZ LIDIA DEL CARMEN; STEFANINI DE GUZMÁN ANA MARÍA

Rosario

Jornada; XIII Jornadas Argentinas de Microbiología; 2008

Asociación Argentina de Microbiología

Hasta el momento las técnicas de detección para el enteropatógeno Yersinia enterocolitica utilizan períodos largos de enriquecimiento seguidos de cultivo en medios selectivos e identificación por pruebas fenotípicas. El objetivo de este trabajo fue comparar 4 técnicas para la detección de cepas de Y. enterocolitica en alimentos cárnicos adquiridos en comercios de la ciudad de San Luis. Se estudiaron 98 muestras: chorizo de puro cerdo 19, chorizo de vacuno y cerdo 26, carne vacuna molida 28 y carcasa de pollo 24. Se tomaron 25g de muestra, se homogenizaron en 225 ml de caldo tripticase soya (TSC) y se cultivaron por 18 h a 25°C. Luego se tomó 1 ml del caldo y se estudiaron las siguientes técnicas: i) se realizó la extracción del ADN utilizando el reactivo PrepMan Ultra (Applied Biosystems) y luego se realizó una nested-PCR para la detección del gen de virulencia yadA, ii) se concentró la muestra por separación inmunomagnética (SIM) utilizando anticuerpos anti-O:9 y O:3 obtenidos en nuestro laboratorio, iii) se colocó el mililitro del cultivo en 10 ml de caldo Rappapord modificado (CRM) y se incubó 4 días a 25ºC y iv) el TSC restante se incubó durante 21 días a 4ºC. Luego de la incubación se realizó el aislamiento en agar cefsulodin-irgasán-novobiocina (CIN) incubando 48 h a 25ºCy finalmente se realizó la identificación de las cepas aisladas por pruebas bioquímicas. Las cepas características de Yersinia se remitieron al Instituto Pasteur, Paris, Francia, para su bio-serotipificación. Mediante la técnica de nested-PCR se obtuvo amplicones de 36 muestras (36,73 %). Por la técnica de enriquecimiento en TSC se aislaron 8 cepas (8,16 %): Y. enterocolitica 2/O:9 (1), 1A/O:5 (2), 1A/O:6,30 (1), 1A/NA (1; no aglutinable) Yersinia intermedia 2/O:37 (1), 2/AA (2; autoaglutinable). Una cepa identificada como Y. enterocolitica 2/O:9, fue aislada mediante la técnica de SIM (1,02 %). No se identificó ninguna cepa por CRM. La cepa Y. enterocolitica 2/O:9 se identificó por PCR, SIM y TSC. La técnica de nested-PCR fue la más sensible para la detección de cepas virulentas de Y. enterocolitica, esta técnica también fue selectiva. El enriquecimiento realizado antes de la extracción de ADN evita la detección de células muertas. Aunque la sensibilidad de la SIM fue menor, su selectividad fue adecuada. Mediante el uso de SIM y nested-PCR se disminuyó considerablemente el período de incubación en relación a cultivo en frío.