Yersinia enterocolitica en alimentos cárnicos, identificación de cepas patógenas por nested PCR y métodos de cultivo

LUCERO ESTRADA CECILIA STELLA MARYS; VELÁZQUEZ LIDIA DEL CARMEN; DI GENARO SILVIA; STEFANINI DE GUZMÁN ANA MARÍA

Buenos Aires, Argentina

Congreso; III Congreso Argentino de Microbiología de Alimentos (III CAMA).; 2006

Sociedad de Biología de Cuyo

Las cepas patógenas de Yersinia enterocolitica presentan un plásmido de virulencia denominado pYV, de 70-75 kb, que codifica factores de virulencia como la adhesina YadA. La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se ha convertido en una técnica muy utilizada para la detección de microorganismos infecciosos. El objetivo de este trabajo fue identificar Y. enterocolitica desde alimentos cárnicos por nested PCR, amplificando el gen yadA, y comparar con los resultados obtenidos por métodos de cultivo convencionales. De diferentes comercios de la ciudad de San Luis, se obtuvieron muestras de: chorizo de puro cerdo (n = 14), chorizo de vacuno y cerdo (n = 15) carne vacuna molida (n = 15). Veinticinco gramos de muestra fueron preenriquecidos en 225 ml de caldo tripticase soja (TSC) a 25°C por 18 h. Cien ml de este caldo se sembraron en 10 ml de caldo Rappaport Modificado (CRM) y se incubaron por 4 días a 25°C. El TSC se continuó incubando a 4°C por 21 días. Transcurrido los respectivos períodos de enriquecimiento, se realizaron aislamientos sobre agar cefsulodin-irgasan-novobiocina (CIN) y agar Mac Conkey (MC) incubando por 48 h a 25°C. Las colonias características en CIN y MC se reaislaron para purificarlas y se identificaron por pruebas bioquímicas. Adicionalmente, se tomó 1 ml de TSC, una vez transcurrido el período de preenriquecimiento, para realizar extracción de ADN utilizando un kit de extracción, PrepMan Ultra, y posterior nested PCR. Cuando se realizó la búsqueda de Y. enterocolitica por métodos de cultivo se aisló 1 cepa (0,15 %) desde chorizo de vacuno y cerdo, y no se obtuvo ningún aislamiento desde chorizo de cerdo o carne vacuna molida. La cepa se aisló luego de un enriquecimiento de 21 días en TSC y posterior selección en agar CIN. Sin embargo, por nested PCR fueron Yad A positivas: 5 muestras (30 %) de chorizo de puro cerdo, 3 muestras (20 %) de chorizo de vacuno y cerdo, y 8 muestras (53 %) de carne vacuna molida. La muestra que se identificó como positiva por el método de cultivo también lo fue por el método molecular. La técnica de nested PCR fue más sensible que los métodos de cultivo tradicionales, ya que se pudieron identificar más muestras positivas. Esta técnica molecular es capaz de identificar cepas patógenas de Y. enterocolitica en alimentos cárnicos sin necesidad de biotipificación o serotipificación.