Susceptibilidad de cultivos primarios de tiroides al virus de la fiebre aftosa y su relación con la expresión en superficie de la integrina alfa-v beta-6

SCHAMMAS, JUAN MANUEL; DI GIACOMO, SEBASTIÁN; BUCAFUSCO, DANILO; PEGA, JUAN FRANCO; CAPOZZO, ALEJANDRA; ZÁBAL, OSVALDO; PÉREZ FILGUEIRA, MARIANO

CABA

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología - II Congreso Latinoamericano de Virología; 2015

Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

El virus de la fiebre aftosa (VFA) es capaz de utilizar integrinas de la familia αv para el ingreso a las células de sus huéspedes naturales. En particular, αvβ3 y αvβ6 parecen jugar un rol importante en la patogenia, siendo αvβ6 la posible vía de entrada principal en bovinos. Actualmente, la línea celular BHK-21 se utiliza de manera estándar para el aislamiento y propagación de VFA, así como para la producción de antígeno vacunal. Sin embargo, esta línea establecida presenta baja permisividad, y por lo tanto baja sensibilidad, a la replicación viral cuando el virus es aislado desde huéspedes naturales, tal como ocurre en los brotes a campo. A su vez, la replicación del virus en BHK-21 selecciona variantes que utilizan una vía secundaria de entrada, a través de receptores de heparán sulfato, perdiendo al mismo tiempo la capacidad de infectar a los huéspedes naturales. El cultivo primario de tiroides bovina ha demostrado ser uno de los de mayor sensibilidad y con mayor espectro de susceptibilidad para los diferentes serotipos, aunque su producción resulta costosa y, por ser un cultivo primario, posee baja repetitividad. Más aún, la propagación de estos cultivos y su pasaje consecutivo con el fin de establecer líneas celulares, trae como consecuencia una rápida y marcada caída de la susceptibilidad a la infección por VFA. En este trabajo se buscó estudiar la posible relación entre la expresión en membrana de la integrina αvβ6 y la pérdida de susceptibilidad en los primeros pasajes a partir de un cultivo primario de tiroides para la cepa O1/Campos de VFA. Para ello se desarrolló una metodología de cuantificación de la integrina αvβ6, basada en citometría de flujo para determinar sus patrones de expresión. Con esta técnica se caracterizaron los perfiles de las sub-poblaciones celulares presentes en los cultivos de tiroides bovina, así como en distintas líneas celulares establecidas (BHK-21, LFBK, LFBKαvβ6, CHO-K1). Esta herramienta fue también utilizada para cuantificar la expresión de esta integrina en pasajes consecutivos de cultivos primarios de tiroides. Los resultados permitieron demostrar que la pérdida de sensibilidad a muy tempranos pasajes de un cultivo de tiroides bovina se ve acompañada de la pérdida de la expresión del receptor celular αvβ6. También en base a su expresión se pudo identificar una población de células de potencial estirpe epitelial que son capaces de expresar la integrina, lo cual puede constituir una herramienta valiosa para la evaluación y, por tanto, de mejora de los cultivos de tiroides bovina producidos. Los resultados en su conjunto sugieren que esta integrina jugaría un rol importante en la sensibilidad de una línea celular, aunque no exclusivo, por lo que es probable que otras integrinas de la familia αv puedan contribuir para determinar más acabadamente el perfil de susceptibilidad al VFA de los cultivos celulares.