DESARROLLO DE ESTRATEGIAS PARA EL DIRECCIONAMIENTO DE ANTIGENOS A CELULAS DENDRITICAS DE BOVINO

STAFFORINI, GUILLERMINA; PEGA, JUAN; BUCAFUSCO, DANILO; DI GIACOMO, SEBASTIAN; PEREZ FILGUEIRA, MARIANO

Buenos Aires

Jornada; III Jornadas de Inmunologia Veterinaria; 2010

Sociedad Argentina de Inmunologia Veterinaria (SAIV)

El objetivo del trabajo es la generacion de herramientas que permitan aumentar la capacidad inmunogenica de antigenos recombinantes. Considerando que el desarrollo de respuestas protectivas contra patogenos virales requiere frecuentemente una participacion de celulas T, cuya activacion esta mediada por celulas dendriticas (DC), una estrategia se baso en direccionar antigenos a DC bovinas, siendo el modelo elegido el virus de la Fiebre Aftosa (VFA). Para ello, se generaron construcciones fusionando la secuencia de un anticuerpo de cadena unica con especificidad por la molecula DEC205 de la superficie de DCs (cc98), con otra de antigenos quimericos derivados del VFA O1 Campos que reuna varios epitopes B y T descriptos. Se generaron ademas dos controles: antigeno sin direccionar y proteina no relacionada fusionada tambien a cc98. La principal puerta de entrada del VFA en bovinos es la aerogena y los sitios de replicacion primaria son los tejidos de mucosas, por ende buscar estimular una respuesta especifica local en estos tejidos, representaria una segunda estrategia sumamente util para conferir proteccion a la infección. Se generaron adenovirus no replicativos como vectores que, tras ser inhalados podran acceder a los tejidos nasofaringeos para transferir los genes de interes a celulas de la mucosa respiratoria. Primeramente, se comprobo la correcta expresion de la proteina quimerica en celulas de mamifero. Ademas se expreso el antigeno direccionado y se comprobo la funcionalidad del cc98 fusionado cuando se evidencio su pegada a celulas transfectadas para expresar DEC205.Se produjo y purifico la proteina a mayor escala y con ella se verifico su reconocimiento por parte de células T especificas provenientes de animales vacunados, mediante un ensayo de ELISPOT IFN-gamma. El antigeno estimulo mayor respuesta que el virus purificado presente en la vacuna. Finalmente, a partir de las construcciones generadas para el antigeno quimerico, se clonaron las secuencias de interes en vectores adenovirales que permitieron generar los adenovirus recombinantes correspondientes. Se verifico su capacidad de estimular la produccion de proteina en celulas infectadas por los mismos. En el presente trabajo se desarrollaron herramientas destinadas a potenciar inmunidad local inducida hacia un antigeno quimerico de VFA, consistentes en adenovirus capaces de expresar proteinas quimericas con epitopes T reconocibles por celulas de animales inmunizados. La funcionalidad del direccionamiento de las fusiones fue ademas comprobado al evidenciarse la pegada de la porcion cc98 a DEC205 de celulas transfectadas.