OPTIMIZACIÓN DE UN ELISA PARA MEDIR NIVELES DE INTERFERÓN-gamma COMO RESULTADO DE LA INMUNIZACIÓN CON DIFERENTES SEROTIPOS DEL VIRUS DE FIEBRE AFTOSA EN BOVINOS

BUCAFUSCO, DANILO; DI GIACOMO, SEBASTIÁN; PEGA, JUAN FRANCO; MALACARI, DARIO; CAPOZZO, ALEJANDRA; SMITSAART, ELIANA; LEVY, SUSANA; PÉREZ FILGUEIRA, MARIANO

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011

Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

Introducción La amplia diversidad antigénica del Virus de Fiebre Aftosa (VFA) y la escasa la protección cruzada entre variantes, obliga a un constante monitoreo y eventualmente actualización de las cepas vacunales en relación a las que circulan regionalmente. Si bien existe información sobre la reactividad cruzada de anticuerpos entre tipos y subtipos del VFA, poco se sabe sobre la capacidad particular de cada serotipo de activar respuestas celulares en animales vacunados con virus homólogos o heterólogos. Objetivo Evaluar la producción de IFN-g como resultado de la inmunización de bovinos con diferentes serotipos de VFA Metodología Para evaluar este tipo de respuestas se adaptamos y estandarizamos para medición de inmunidad celular contra el VFA, un ELISA comercial Bovigam® (Prionics) diseñado para detectar IFN-g bovino inducido por antígenos de Mycobacterium Tuberculosis. Para la puesta a punto se utilizaron 283 bovinos vacunados y 106 bovinos näive. Utilizando sangre de estos animales se probaron diferentes concentraciones VFA inactivado y purificado de las cepas O1C, A24, A2001, A87 y C3I. Comprobamos que la incubación de la sangre entera (750 μl) durante 16-24h con 10μg/ml de virus purificado y como controles el mitógeno Pokeweed (PWM) (10 μg/ml) o PBS (+ y -, respectivamente), daba los resultados más consistentes y repetibles. Se traspasan luego 50 μl de sobrenadante (plasma) a las placas de detección del kit. El resto del ensayo se realiza siguiendo las instrucciones del fabricante y se incluye una curva estándar con concentraciones conocidas de INF-g bovino recombinante (AbD Serotec). Finalmente, el ensayo fue utilizado en pruebas vacunales de potencia y de vaccine matching para los serotipos O y A Resultados Se fijaron los límites de detección de la técnica desde 0,195 a 25 ng/ml de IFN-g. La estimulación con PWM actúa como control de la viabilidad y funcionalidad de las células, estableciendo como muestras válidas las producen 3,2 ng/ml de IFN-g con PWM y g similares a otras cepas del mismo serotipo y a C3I (pg significativamente mayores al PBS pero similares a la estimulación con las restantes cepas heterólogas. Conclusiones No observamos una correlación clara entre la inducción de IFN-g y la protección conferida en los animales vacunados. La estimulación heteróloga de la inmunidad celular, medida como producción de IFN-g, es más frecuente y por lo tanto menos restringida que la previamente reportada para la inmunidad humoral Observamos diferencias entre cepas en su capacidad de inducir una respuesta celular, tal lo visto para la cepa A24 Cruzeiro que posee mayor capacidad de inducción de IFN-g tanto al ser utilizado como inmunógeno o como antígeno estimulante ex vivo