DESARROLLO DE ENSAYOS PARA LA MEDICIÓN DE INTERFERÓN GAMMA INDUCIDO POR VACUNACIÓN E INFECCIÓN CON EL VIRUS DE LA FIEBRE AFTOSA (VFA) EN BOVINOS

BUCAFUSCO, DANILO; PEGA, JUAN FRANCO; STAFFORINI, GUILLERMINA; OLIVERA, VALERIA; ZAMORANO, PATRICIA; COMPAIRED, DIEGO; GUINZBURG, MARIELA; SMITSAART, ELIANA; PÉREZ FILGUEIRA, MARIANO

Huerta Grande, Córdoba

Jornada; XXIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología (SAV); 2009

Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

Diversos marcadores inmunológicos se han propuesto para complementar la información obtenida de la inmunidad humoral contra el VFA a fin de predecir más ajustadamente la protección al desafío y la posibilidad de persistencia viral posterior. Uno de ellos es el Interferón Gamma (IFN-gamma) que es producido por células T (CD4+ y CD8+) y NK activadas y utilizado como indicador de activación de la inmunidad celular. Con este fin, se propuso desarrollar técnicas de medición de la producción de IFN-gamma en bovinos en modelos de vacunación e infección con el VFA. Se desarrolló un ensayo de ELISpot para células productoras de IFN-gamma y un ensayo de ELISA para la medición directa de la interleuquina, basado en un ensayo comercial [Bovigam® (Prionics, Suiza)].Para el ajuste de las condiciones de estos ensayos, se utilizaron 10 bovinos provenientes del Campo Experimental de INTA-Castelar: 4 con al menos 3 dosis de una vacuna comercial tetravalente, 4 con una sola dosis de la misma vacuna y 2 sin vacunar. Todos animales fueron sangrados 28 días luego de completado el esquema de vacunación y se obtuvieron sangre entera y células mononucleares periféricas (PBMC)Para el ELISA, ambos tipos de muestras fueron incubadas con distintas concentraciones de VFA O1 Campos inactivado por 24, 48 y 72 h, utilizándose Pokeweed Mitogen (PWM) como control positivo y PBS para detectar la secreción basal de INF-gamma de cada animal. Para el ELISpot, se utilizaron PBMC en distintas concentraciones sobre una matriz de nitrocelulosa sensibilizada con un anticuerpo monoclonal (AcM) de captura anti-IFN-gamma bovino. Las células fueron incubadas durante 36 h en presencia de los mismos antígenos descritos previamente y luego removidas. La existencia de células productoras de IFN-gamma se detectó con un 2do AcM contra IFN-gamma biotinilado que luego fue revelado con estreptoavidina-peroxidasa y True-Blue (KPL, RU). El título de anticuerpos (Ac) anti-VFA en los animales vacunados fue medido por ELISA en fase líquida (ELISA-fl) para observar la correlación entre ambos parámetros de inmunidad.Como parte del proceso de ajuste, se evaluó la producción de IFN-gamma en 19 bovinos pertenecientes a una prueba de potencia de vacuna antiaftosa. Se obtuvieron muestras de sangre a los 90 días post-vacunación y previo al desafío, siendo procesadas según lo descrito previamente. Los resultados de IFN-gamma fueron correlacionados posteriormente con los de protección al desafío viral y con los títulos de Ac medidos por ELISA-fl, para analizar el valor predictivo de esta técnica. Es posible cuantificar tanto la cantidad de células productoras como la producción de IFN-gamma inducidas específicamente con vacunas anti-VFA en bovinos. El uso de PMBC no presenta ventajas respecto a la sangre entera y en altas concentraciones de células la detección del IFN-gamma disminuye. Esta también se reduce a mayores tiempos de incubación, siendo su produccion in vitro dependiente de la concentración de VFA estimulante en todos los casos. Nuestros resultados demuestran que estos ensayos pueden servir para establecer la correlación entre la inducción de IFN-gamma y la eficacia de los inmunógenos anti-VFA.