DETECCIÓN DE CÉLULAS SECRETORAS DE ANTICUERPOS ESPECÍFICAS PARA EL VIRUS DE LA FIEBRE AFTOSA A PARTIR DE TEJIDOS LINFOIDES DE MUCOSAS EN BOVINOS

PEGA, JUAN FRANCO; BUCAFUSCO, DANILO; STAFFORINI, GULLERMINA; BORCA, MANUEL VÍCTOR; PÉREZ FILGUEIRA, MARIANO

Huerta Grande, Córdoba

Jornada; XXIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología (SAV); 2009

Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

La respuesta inmune adaptativa inducida en bovinos a nivel local luego de la infección con el Virus de la Fiebre Aftosa (VFA) es capaz de condicionar su patogenia, debido en gran parte a que los anticuerpos neutralizantes constituyen la principal herramienta para la eliminación del virus y a que los niveles de los mismos en la región orofaríngea y en suero se correlacionan con protección frente a posteriores reinfecciones. De estos antecedentes se desprende la importancia de las respuestas adaptativas que se producen localmente, luego de la entrada del VFA y durante la etapa pre-virémica en el tracto respiratorio, y al rol que cumplen en el destino final de la infección.Este trabajo presenta la puesta a punto de estrategias para detectar células secretoras de anticuerpos (ASC) específicas para el VFA en tejidos linfoides de mucosas de bovinos y su utilización en estos últimos luego de una infección experimental por vía intradermolingual, entre 7 y 11 días post-desafío con el serotipo O1 Campos del VFA.Con este fin, se ajustaron las condiciones de un ensayo de ELISPOT para ASC contra VFA. Los parámetros ajustados incluyen el tipo de placa, la matriz antigénica, estrategias de bloqueo y métodos de obtención de células. La técnica fue optimizada utilizando secuencialmente hibridomas productores de anticuerpos específicos para aftosa, células mononucleares periféricas de bovinos vacunados y finalmente células provenientes de tejidos linfoides de bovinos infectados. Las estructuras muestreadas en este caso comprendieron: linfonódulos mandibulares, tonsilas palatinas, paladar blando dorsal, linfonódulos retrofaríngeos mediales y laterales, tonsila faríngea y bazo. Las muestras fueron extraídas y procesadas en condiciones de contención biológica nivel NSB-3A a fin de obtener suspensiones celulares aisladas, las cuales se analizaron para detectar y cuantificar ASC de anticuerpos específicas para el VFA O1 Campos. Por primera vez se desarrolló un ensayo de ELISPOT capaz de detectar ASC específicas para el VFA en el ganado bovino. Empleando este ensayo ex-vivo se determinaron las diferencias respecto a la frecuencia de ASC específicas para el VFA en varios tejidos de mucosas de animales vírgenes y vacunados infectados experimentalmente con el virus. Los resultados muestran que al menos 7 días luego de la infección experimental con el virus activo es posible detectar respuestas específicas humorales contra el VFA en tejidos de mucosas de bovino y que estas tienen perfiles diferenciales de acuerdo al estado inmunitario previo del animal respecto al VFA.