Estudio comparativo de las anormalidades producidas durante el desarrollo en embriones de pejerrey (Odontesthes bonariensis) y medaka (Oryzias latipes) enfriados a temperaturas bajo cero.

MACORETTA CL; CASTAÑEDA-CORTÉS DC; MIRANDA LA

Mendoza

Congreso; IV Reunión Conjunta de Sociedades de Biología de la República Argentina.; 2020

El pez Betta splendens es una especie de aguadulce, nativa del sudeste asiático, que se caracteriza por su dimorfismosexual, comportamiento territorial, cortejo nupcial, y construcción de un nidode burbujas y cuidado de los embriones por parte del macho. Posee granimportancia económica y científica por su valor ornamental y como especiemodelo de laboratorio para la realización de estudios de comportamiento yensayos de toxicidad. Los objetivos de este trabajo fueron: (1) evaluar laposibilidad de incubar a los embriones sin cuidado parental; (2) obteneroocitos y esperma para realizar fecundaciones in vitro; y, (3)criopreservar esperma. En primer lugar, se recolectaron los desoves dedistintas parejas y se incubaron sin la presencia del macho en cajas de Petrien tres condiciones distintas: (a) sin desarmar el nido de burbujas, (b)evitando la adherencia de los embriones empleando una solución de PBS:leche2,5% p/v, y (c) disminuyendo la tensión superficial empleando soluciones de Tween20 (0,1 y 0,05% v/v). Se evaluó la supervivencia embrionaria, la eclosión yla presencia de malformaciones. El mejor resultado se obtuvo empleando Tween20 0,05% v/v en combinación con una agitación suave para disgregar el nidoy liberar a los embriones. Estos fueron incubados en agua esterilizada con elagregado de azul de metileno 0,01% v/v, sin agitación, en una incubadoraprogramable a 28 °C, 12 h L: 12 h O. Se obtuvo una eclosión del 77±15% y unaprevalencia de malformaciones del 26±9%. En segundo lugar, se intentaronextraer las gametas mediante masaje abdominal de los peces maduros y listospara desovar, pero solo fue exitoso en el caso de las hembras. Para el caso delos machos, se procedió a obtener el esperma mediante la disección y disgregadode cada uno de los testículos en 25 µl de dos diluyentes distintos (A: NaCl94mM, KCl 27mM, Tris-HCl 15mM, Glicina 50mM; B: NaCl 128mM, CaCl218mM, KCl 27mM, NaHCO3 24mM), respectivamente. Por último, dichasmuestras fueran diluidas a la mitad con el agregado de DMSO (concentraciónfinal 10% v/v) y criopreservadas empleando una curva de descenso de temperaturacontrolada (4°C 20 m, -10 °C/m, -60 °C 5 m, -196 °C 10 m). En ambos casos, seobtuvieron espermatozoides mótiles luego del descongelamiento, observándose mayorcantidad de los mismos cuando se empleó el diluyente A. Estos resultados muestranque es posible realizar la incubación de los embriones fuera del nido deburbujas y sin cuidado parental. Asimismo, sientan las bases para futuros trabajosen esta área, como evaluar las muestras de esperma pre- y pos-congelamientoempleando el sistema CASA, y estudiar su capacidad fecundante, a fin de obtenerembriones in vitro.