INTECH   27907
INSTITUTO TECNOLOGICO DE CHASCOMUS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
USO DE LAS HSP90 DE PLANTAS COMO UNA ESTRATEGIA PARA MEJORAR LA EXPRESIÓN DE PÉPTIDOS ANTIGÉNICOS EN SISTEMAS VEGETALES
Autor/es:
SÁNCHEZ LÓPEZ EDWIN; RAMOS DUARTE, V.A; CLEMENTE, M.; RADONIC L; SANDER VA; CORIGLIANO MG; LOPEZ M
Lugar:
La Plata
Reunión:
Taller; Taller de Molecular Farming; 2019
Institución organizadora:
CCT-LA PLATA
Resumen:
Existe una necesidad urgente de desarrollar vacunas contra Toxoplasma gondii. Dado que el portal de entrada de T. gondii es la mucosa, la infección por Toxoplasma es un modelo interesante para estudiar la optimización de los sistemas de expresión basados en plantas y para evaluar la efectividad de las vacunas orales de origen vegetal. En este sentido, para mejorar los niveles de expresión de antígenos vacunales expresados en plantas, evaluamos el papel de las Hsp90 de plantas como carriers del antígeno SAG1. Probamos el sistema de transformación estable en plantas de lechuga y el de expresión transitoria en hojas de tabaco mediante agroinfiltración. Se evaluó el rendimiento de cuatro construcciones diferentes que expresan la proteína SAG1 madura (SAG1m) o un péptido que contiene solo los epítopes de respuesta de células B y T de la proteína SAG1 (SAG1HC), fusionado a las Hsp90 de Nicotiana benthamiana (NbHsp90 .3) o de Arabidopsis thaliana (AtHsp81.2). La agroinfiltración con la construcción AtHsp81.2-SAG1HC produjo el nivel más alto de expresión de SAG1 siendo la acumulación de proteína AtHsp81.2-SAG1HC 60 veces mayor que AtHsp81.2-SAG1m (120 μg de AtHsp81.2-SAG1HC frente a 2 μg de AtHsp81 .2-SAG1m por gramo de hoja fresca). Asimismo, se logró estandarizar las condiciones de purificación para la versión AtHsp81.2-SAG1HC mediante cromatografía de afinidad en resina de Ni+2. Por otro lado, los rendimientos de SAG1m en plantas de lechuga transgénicas que expresan AtHsp81.2-SAG1m o NbHsp90.3-SAG1m oscilaron entre 35 y 45 μg por g de hoja liofilizada. Finalmente, un total de 5 muestras de suero humano positivas pudieron reaccionar con las proteínas de fusión recombinantes, lo que sugiere que las versiones de SAG1 fusionadas a Hsp90 de plantas pueden ser reconocidas por anticuerpos de humanos infectados con T. gondii. Nuestros resultados sugieren que las Hsp90 de plantas mejoran los rendimientos de proteínas recombinantes en las plantas y tienen el potencial de potenciar la respuesta inmune en protocolos de inmunización.