El transporte de MICA hacia el citoplasma y su degradación en el proteasoma son responsables de su retención intracelular en melanomas humanos

MERCEDES BEATRIZ FUERTES; MARÍA VICTORIA GIRART; LUCAS EZEQUIEL ROSSI; CAROLINA INES DOMAICA; NORBERTO WALTER ZWIRNER

Mar del Plata, Argentina.

Congreso; 54º Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2006

Sociedad Argentina de Inmunología

Las células tumorales expresan ligandos del receptor activador de citotoxicidad NKG2D, presente en células NK, linfocitos T CD8+. A pesar de ello progresan en su crecimiento. Entre los ligandos de NKG2D se destaca la proteína polimórfica de membrana MICA. Recientemente describimos un novedoso mecanismo de escape tumoral en melanomas basado en la retención de MICA en el retículo endoplásmico (RE) y demostramos que su sobre-expresión promueve un rechazo tumoral y apoptosis in vivo más eficientes mediados por células NK. Objetivo: elucidar el mecanismo bioquímico responsable de prevenir la expresión de MICA en superficie celular. Analizamos la secuencia de MICA en las 10 líneas de melanomas estudiadas y concluimos que la retención no está asociada a la expresión de alelos de MICA en particular. Por ultracentrifugaciones diferenciales y western blot detectamos expresión de MICA en la fracción citoplasmática del melanoma humano MEL-LES (no expresa MICA en superficie por retención en RE). Además, realizamos cultivos de MEL-LES con el inhibidor del proteasoma Bortezomib y analizamos la expresión de MICA por citometría de flujo. La inhibición de la degradación de proteínas en el proteasoma durante 24h indujo un aumento en la expresión de MICA en superficie en MEL-LES de 2,26±0,6 veces (n=3 experimentos). Por otro lado, cuando inhibimos la síntesis proteica de novo con cicloheximida durante 4h, no detectamos expresión de MICA en MEL-LES pero sí en el melanoma MEL-IAN (que expresa MICA normalmente en superficie). Conclusiones: nuestros resultados sugieren la existencia de un transporte retrógrado de MICA desde el RE hacia el citoplasma, lo que promueve la degradación de este NKG2DL en el proteasoma, en melanomas que retienen a esta molécula en el RE. Además, esta retención es debida a una mayor inestabilidad de la proteína, por lo que la combinación de estos 2 efectos sería la responsable de prevenir la expresión de MICA en superficie.