Biosensor electroquimico basado en un compósito de lipasa / magnetita-quitosano / nanopartículas de óxido de Cu / nanotubos de carbono / pectina: determinacion de trigliceridos en muestras de suero

DI TOCCO, A.; ARÉVALO, F. J.; ZON, M. A.; SANDOVAL, J.; ILINÁ, A.; FERNÁNDEZ, H.

Montevideo

Congreso; IV CONGRESO URUGUAYO DE QUÍMICA ANALÍTICA; 2016

Asociación Uruguaya de Química Analítica

Biosensor electroquimico basado en un compósito de lipasa / magnetita-quitosano / nanopartículas de óxido de Cu / nanotubos de carbono / pectina: determinacion de trigliceridos en muestras de sueroDi Tocco, Aylen1; Arévalo, Fernando Javier1; Zon, María Alicia1; Sandoval Cortés, José2; Iliná, Anna2; Fernández, Héctor11Grupo de Electroanalítica (GEANA). Departamento de Química. Facultad de Ciencias Exactas, Físico-Químicas y Naturales, Universidad Nacional de Río Cuarto. Agencia Postal N 3. (5800) ? Río Cuarto, Argentina.2Departamento de Tecnología Química. Facultad de Ingeniería. Universidad Autónoma de Coahuila, Facultad de Ciencias Químicas, Saltillo, México.ObjetivosDeterminar la concentración de triglicéridos en muestras de suero mediante el desarrollo de un biosensor electroquímico. MetodologíaEn este trabajo se aplicó una metodología electroanalítica para la determinación de triglicéridos en muestras de sueros sintéticos mediante el desarrollo de un biosensor electroquímico enzimático. Este consistió en un compósito de la enzima lipasa (L) inmovilizada en nanopartículas magnéticas (10 nm de diámetro) modificadas con quitosano (NpQ-L), nanotubos de carbono de pared múltiple (NTCPM) y nanopartículas de óxido de cobre (NpCu), sobre un electrodo de carbono vítreo (CV). El funcionamiento del biosensor está basado en la acción de la lipasa que hidroliza los triglicéridos presentes en muestras de sueros para formar ácidos grasos y glicerol, el que a su vez es oxidado electroquímicamente sobre la superficie del electrodo en presencia de las NpCu aplicando un potencial de 1 V vs Ag/AgCl. La corriente producida es proporcional a la cantidad de triglicéridos de la muestra. Las técnicas electroquímicas empleadas fueron voltamperometría cíclica (VC) y cronoamperometría (CA). Como triglicérido modelo se utilizó trioleina.ResultadosSe optimizaron todos los parámetros concernientes a la generación del compósito, como la composición de NTCPM y del agente dispersante (pectina), el tiempo y la temperatura de ultrasonido y también la generación de las NpCu, mediante la electrodeposición de Cu a partir de una solución de Cu2+, con posterior obtención de sus óxidos en medio alcalino. La carga enzimática sobre el electrodo también fue estudiada. Con los parámetros optimizados se realizó una curva de trabajo en solución amortiguadora de fosfatos, empleando CA como técnica electroquímica, para la determinación de trioleína, encontrándose un intervalo lineal de concentración comprendido entre 10 y 500 M. Los límites de detección y de cuantificación fueron 8,47 M y 25,84 M, respectivamente. Los ensayos de reproducibilidad y repetitividad mostraron valores de desviaciones estándar inferiores a 5 %. Posteriormente, se realizó la determinación de triglicéridos en muestras de suero. Se utilizaron dos estándares de control de suero liofilizado Standatrol S-E Wiener Lab. Los mismos fueron reconstituidos y posteriormente diluidos en solución amortiguadora de fosfatos. Los resultados obtenidos fueron comparados con el método TG Color GPA-POP, Wiener Lab.ConclusionesSe desarrolló un biosensor electroquímico para la determinación de triglicéridos en suero, y los resultados fueron comparados con el ensayo colorimétrico clínico, encontrándose una buena correspondencia entre ambas metodologías de detección. Agradecimientos:Los autores agradecen al Consejo Interuniversitario Nacional (CIN) por la Beca de Estímulo a las Vocaciones Científicas, CONICET, FONCYT, MINCyT/Córdoba, SECyT/UNRC y CONACYT (México) los subsidios otorgados.