Desarrollo de un magneto-inmunosensor electroquímico para la detección de Escherichia coli F4 (K88)

TARDITTO, L.V.; ARÉVALO, F. J.; VETTORAZZI, N. R.; ZON, M. A.; GARCIA OVANDO, H.; FERNÁNDEZ, H.

La Plata

Congreso; VIII CONGRESO ARGENTINO DE QUÍMICA ANALÍTICA,; 2015

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

Desarrollo de un magneto-inmunosensor electroquímico para la detección de Escherichia coli F4 (K88) Tarditto, L.1*; Arévalo, F.J.1; Vettorazzi, N.R.1; Zon, M.A.1, García Ovando, H2; Fernández, H1 1.Dpto. de Química, Facultad de Ciencias Exactas, Físico-Químicas y Naturales. 2.Dpto. de Clínica Animal, Facultad de Agronomía y Veterinaria.Universidad Nacional de Río Cuarto. Agencia Postal Nº3 (5800). Río Cuarto, Córdoba. *e-mail: ltarditto@exa.unrc.edu.arLa detección de microorganismos patógenos se realiza mediante técnicas convencionales basadas en cultivos, técnicas moleculares y métodos inmunológicos [1]. Si bien cada técnica tiene numerosas ventajas, la aplicación en diagnósticos de rutina se ve limitada principalmente por el tiempo y los costos [2]. Por otra parte, Escherichia coli enterotoxicogénica F4 (K88) (ETEC) es uno de los principales agentes etiológicos involucrados en infecciones que generan importantes pérdidas económicas en establecimientos de producción porcina [3].El objetivo de este trabajo es desarrollar un inmunosensor electroquímico que permita detectar de ETEC de manera selectiva, simple, rápida y económica. Para ello se utilizaron electrodos de carbono de capa impresa (ECI) y partículas magnéticas conjugadas con anticuerpos anti-ETEC. La detección electroquímica se basó en la actividad de la -galactosidasa (-Gal), enzima producida naturalmente por E. coli. La hidrólisis del sustrato p-aminofenil--D-galactopiranósido (PAFG), catalizada por la -Gal, genera el producto electroactivo p-aminofenol (PAF), el cual es oxidado sobre la superficie del electrodo empleando voltamperometría de onda cuadrada (VOC).Se utilizaron suspensiones puras de ETEC, preparadas en solución amortiguadora de fosfatos 10 mM, a las cuales se les realizó un enriquecimiento utilizando isopropyl--D-1-tiogalactopiranósido (IPTG), para inducir la expresión de genes que codifican la -Gal. La sensibilidad se incrementó utilizando sulfato de polimixina B como permeabilizador (poner concentración y tiempo optimizado). Se analizó la influencia del tiempo necesario para que el metabolismo bacteriano produzca una cantidad detectable de PAF (tiempo de reacción poner valor) y del tiempo de permeabilización (poner cuanto). Se optimizaron las concentraciones del sustrato PAFG (poner valor), anticuerpo de captura (poner valor) y volumen de partículas magnéticas (poner valor). Se realizó una curva de calibrado en el intervalo de concentración comprendido entre 1,53 x103 ? 1,53 x107 UFC mL-1. Poner límite de cuantificación. Y una conclusión SI TE FALTA LUGAR SACÁ UNA REFERENCIAReferencias[1] Syed, M.A. (2014). Biosens. Bioelectron. 51, 391-400. [2] Toze, S. (1999). Water Res. 33, 3545 ? 3556.[3] Nagy, B.; Fekete, P.Z. (1999). Vet. Res., 30, 259-284.