Desarrollo de un novedoso inmunosensor electroquímico para la determinación de 17BETA-estradiol en suero animal

MELISA JIMENA MONERRIS; FERNANDO JAVIER ARÉVALO; HÉCTOR FERNÁNDEZ; MARÍA ALICIA ZÓN; PATRICIA GABRIELA MOLINA

Mendoza

Congreso; VII CONGRESO ARGENTINO DE QUÍMICA ANALÍTICA; 2013

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

Los estrógenos y los progestágenos son hormonas endógenas que producen gran variedad de efectos fisiológicos. En el caso de las hembras, dichos efectos comprenden acciones vinculadas con el desarrollo, problemas neuroendócrinos involucrados en el control de la ovulación, preparación cíclica de las vías de reproducción para la fecundación e implantación, siendo los principales efectos aquellos generados sobre el metabolismo de minerales, carbohidratos, proteínas y lípidos. El estrógeno natural más potente en mamíferos es el 17BETA-Estradiol (17BETA-E), seguido por la estrona y el estriol. Estos compuestos son muy importantes, ya que sus concentraciones y cambios afectan la salud de los mamíferos[1]. El objetivo de este trabajo es desarrollar un inmunosensor electroquímico basado en nanopartículas de oro para determinar 17BETA-E en suero animal a niveles de trazas. El inmunosensor consiste en un electrodo de oro modificado con una monocapa autoensamblada de cisteamina y nanopartículas de oro, sobre las cuales se adsorbe el anticuerpo monoclonal anti-17BETA-E (mAb-17 BETA-E). El electrodo modificado se inserta dentro de una micro celda  electroquímica, que opera con un volumen de 200 µL. La determinación de 17BETA-E (antígeno) se realiza mediante un inmunoensayo enzimático utilizando la voltamperometría de onda cuadrada como técnica de detección. La enzima utilizada fue la peroxidasa de rábano picante, HRP, la cual se encuentra en solución. El  17BETA-E es sustrato de la HRP.  El 17BETA-E, presente en la muestra, interacciona con el anticuerpo inmobilizado sobre la superficie del electrodo. Como sustrato enzimático se utiliza peróxido de hidrógeno, el cual es reducido por la HRP que, en presencia de 17BETA-E o bien del catecol (H2Q) (mediador redox) vuelve a su estado nativo. El inmunosensor detecta la reducción de la quinona (Q) generada enzimáticamente, cuyo valor es inversamente proporcional a la concentración de 17BETA-E (ver Fig 1). Se realizaron estudios a fin de optimizar las condiciones experimentales de respuesta del inmunosensor, tales como las concentraciones de HRP, H2O2, y H2Q. Se realizaron las correspondientes curvas de calibración, como así también  estudios de reproducibilidad y tiempo de vida útil del inmunosensor. Se logró detectar 17BETA-E a niveles de trazas (pg/mL) en suero animal con un inmunosensor de formato más sencillo, dado que en este caso la hormona no necesita ser marcada, tal como ocurre con los publicados en la literatura.