NOVEDOSO INMUNOSENSOR ELECTROQUÍMICO USANDO ANALITOS PÉPTIDOS-MIMÉTICOS (FAGOS) PARA LA DETERMINACIÓN DEL HERBICIDA MOLINATO

FERNANDO J. AREVALO; GUALBERTO GONZÁLEZ-SAPIENZA; M. A. ZÓN; HÉCTOR FERNÁNDEZ

Santa Fe

Congreso; VI CONGRESO ARGENTINO DE QUÍMICA ANALÍTICA; 2011

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

La síntesis de analitos péptidos miméticos abre grandes oportunidades para el desarrollo deinmunoensayos. Estos péptidos pueden ser seleccionados desde una librería de fagos en unamanera simple y sistemática [1].En este trabajo, se muestran resultados obtenidos en el desarrollo de un magnetoinmunosensorelectroquímico (IE) empleando fagos (analito péptido-mimético) como unsustituto del analito competidor. Como analito de prueba se empleó el herbicida molinato, usadoen el cultivo de arroz. Se empleó agua superficial del Río Cuarto contaminada ex profeso comomuestra.El inmunosensor estuvo compuesto de micro-esferas magnéticas (EM) modificadas conproteína G y de electrodos de láminas impresas de carbono (ELIC).Como técnica electroquímica se utilizó la voltamperometría de onda cuadrada (VOC). Elensayo fue llevado a cabo de una manera simple, rápida y precisa sin la necesidad de un pretratamientode la muestra.ResultadosLa determinación de Mo estuvo basada en un inmunoensayo competitivo directo entre Moy la suspensión de fago por una cantidad limitada de anticuerpo monoclonal anti-molinato(14D7), el cual se encontró inmovilizado sobre las EM. El 14D7 tuvo afinidad tanto para Mo,como para el fago. La interacción entre el fago y el 14D7 fue detectada empleando el anticuerpomonoclonal anti M13 (α-M13) conjugado con la enzima peroxidasa de rábano picante (HRP).Luego, se agregó el sustrato enzimático (H2O2) conjuntamente con un mediador redox(pirocatecol, H2Q). HRP, en presencia de H2O2 cataliza la oxidación de H2Q a ortobenzoquinona(Q), la cual es susceptible de ser reducida electroquímicamente. La corriente depico (Ip,c) obtenida es inversamente proporcional a la cantidad de Mo de la muestra.Primeramente se determinaron las concentraciones óptimas del 14D7 y de fago quepermitieron un óptimo ensayo competitivo, empleando tanto técnicas colorimétricas comoelectroquímicas. Por otra parte, el α-M13 fue utilizado en una dilución 1:5000.Las concentraciones de H2O2 y H2Q también fueron optimizadas, así como la cantidad deEM. A partir de estos resultados se realizaron curvas de calibración alcanzado un límite dedetección del orden de sub-ppb. Pruebas de reproducibilidad y determinación de molinato enmuestras de agua superficiales de río fueron realizadas con %CV inferiores a 6 % y valores derecuperación promedio de 95%.AgradecimientosLos autores agradecen al Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas(CONICET), CYTED y a SECyT/UNRC los subsidios otorgados que hicieron posible larealización de este trabajo.