Desarrollo de un inmunosensor electroquímico con nanoparticulas de oro para la determinación de progesterona

M. J. MONERRIS; F. J. ARÉVALO; H. FERNÁNDEZ; M. A. ZÓN; P. G. MOLINA

Córdoba

Congreso; XVII CONGRESO ARGENTINO DE FISICOQUIMICA Y QUIMICA INORGANICA; 2011

Asociación Argentina de Investigación Fisicoquímica

DESARROLLO DE UN INMUNOSENSOR ELECTROQUÍMICO CON NANOPARTICULAS DE ORO PARA LA DETERMINACIÓN DE PROGESTERONAMelisa Jimena Monerris, Fernando Javier Arévalo, Héctor Fernández, María Alicia Zon, Patricia Gabriela MolinaDepartamento de Química. Facultad de Ciencias Exactas, Físico-Químicas y Naturales. Universidad Nacional de Río Cuarto. Agencia Postal N 3. (5800) Río Cuarto. ARGENTINA. mmonerris@exa.unrc.edu.ar.Introducción:Progesterona (P4) (4-pregnona-3,20 diona), una cetona , no saturada, es la principal hormona esteroide producida por el ovario, a través del cuerpo lúteo, en todos los animales y en la mujer. La principal función de P4 es mantener la gestación en sus primeras etapas. En consecuencia, monitorear los niveles de P4 es importante para diagnosticar una insuficiencia de la misma, siendo ésta una de las principales causas de falla reproductiva en las especies de interés del sector productivo (yegua, vaca, cabra, cerda y oveja). En el área de estudio de reproducción de pequeños animales, se utilizan, para determinar P4, kits comerciales de ensayos semi-cuantitativo (ELISA) y cuantitativo (RIA). Estos métodos son costosos y, además, requieren de tiempos largos de análisis.Objetivo:Encontrar los parámetros óptimos para el desarrollo de un inmunosensor electroquímico con nanopartículas de oro con capacidad para determinar P4 en niveles de trazas.Resultados:El inmunosensor esta compuesto por un electrodo de oro modificado con una monocapa autoensamblada de cisteamina y nanopartículas de oro sobre las cuales se adsorbe el anticuerpo monoclonal antiprogesterona. El mismo va inserto dentro de una micro celda que opera con un volumen de 120 μL. Se realizaron estudios a fin de encontrar los parámetros óptimos de modificación del electrodo con el objeto de optimizar la respuesta. Estos parámetros son: concentración de cisteamina, tiempo de incubación de la misma, concentración de nanopartículas y su respectivo tiempo de incubación. Los estudios fueron realizados utilizando voltamperometría cíclica como técnica electroquímica. Se muestran resultados comparativos entre los estudios realizados con electrodos modificados con nanopartículas de oro y aquellos modificados con diferentes tioles en ausencia de nanopartículas de oro a fin de mostrar las ventajas en cuanto a la sensibilidad adquirida cuando se utilizan las mismas.La determinación de P4 fue realizada mediante un inmunoensayo enzimático competitivo para el antígeno utilizando la voltamperometría de onda cuadrada como técnica de detección. Para ello se necesitó del marcado (unión) de P4 a una enzima (peroxidasa de rábano picante, HRP) y se realizó su caracterización espectroscópica. La determinación de P4 se basó en la electroxidación de una benzoquinona generada a partir de un ciclo catalítico en donde participa la HRP, su sustrato enzimático (H2O2, 1 mM) y el mediador rédox (catecol, 1 mM).Conclusión: Los resultados muestran una mayor sensibilidad del inmunosensor cuando el electrodo es modificado con nanopartículas de oro. Se lograron optimizar las condiciones experimentales lo cual permitió detectar P4 a niveles de trazas.