DESARROLLO DE UN INMUNOSENSOR ELECTROQUÍMICO PARA LA DETERMINACIÓN DE LA MICOTOXINA CITRININA (CIT)

F. J. ARÉVALO; H. FERNÁNDEZ; J. RABA; M. A. ZÓN

Viña del Mar. Chile

Congreso; IV CONGRESO IBEROAMERICANO DE QUÍMICA ANALÍTICA. X ENCUENTRO NACIONAL DE QUÍMICA ANALÍTICA Y AMBIANTAL – IV CIAQA y X-ENQAA 2010; 2010

Asociación Iberoamericana de Química Analítica

DESARROLLO DE UN INMUNOSENSOR ELECTROQUÍMICO PARA LADETERMINACIÓN DE LA MICOTOXINA CITRININA (CIT)F. J. Arévalo, H. Fernández, J. Raba, M. A. ZónDepartamento de Química. Facultad de Ciencias Exactas, Físico-Químicas yNaturales. Universidad Nacional de RíoCuarto. Agencia Postal N 3. (5800) – Río Cuarto, Argentina. farevalo@exa.unrc.edu.arINQUISAL, Departamento de Química, Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia,Universidad Nacional de San Luis, San Luis, Argentina.Citrinina (CIT) ó (3R,4S)-4,6-dihidro-8-hidroxi-3,4,5-trimetil-6-oxo-3H-2-benzopirano-7- ácido carboxílico, es una micotoxina producida por hongos del género Aspergillus yPenicillium1. CIT es un metabolito tóxico y carcinogénico que contamina,fundamentalmente, cereales y frutas1. Se han reportado recientemente diferentesmétodos analíticos para su determinación, siendo la mayoría de ellos cromatográficos2.En este trabajo se muestran los datos experimentales obtenidos para el desarrollo de uninmunosensor amperométrico en un sistema de flujo continuo/frenado, el cual es capazde determinar CIT en niveles de trazas en muestras de arroz, de manera rápida, precisa ycon un consumo mínimo de reactivos. La detección de CIT se basó en uninmunoensayo. Para ello se empleó una celda electroquímica de flujo la cual operó conun volumen inferior a 10 μL. La celda estuvo compuesta por un disco de oro modificadocon CIT, el cual se ubicó de manera adyacente a un electrodo de carbono vítreo, queactuó como electrodo de trabajo. El soporte de la celda fue de acero inoxidable y actuócomo contraelectrodo y, como electrodo de referencia, se empleó un electrodo deAg/AgCl. La determinación de CIT se basó en un inmunoensayo enzimáticocompetitivo heterogéneo para el antígeno3. Para ello, se necesitó unir CIT a OVA(ovoalbúmina)(OVA-CIT), la cual se inmovilizó sobre la superficie del disco de oromodificado con cisteamina mediante el empleo de glutaraldehído4. La determinación deCIT se basó en una competencia por una cantidad limitada de anticuerpo monoclonalanticitrinina (mAb-CIT) por la CIT de la muestra y la inmovilizada. Luego del ensayocompetitivo, se agregó un anticuerpo secundario unido a la enzima peroxidasa derábano picante (HRP) que interaccionó con mAb-CIT. La determinación de CIT sebasó, luego del ensayo competitivo, en la electrooxidación de una benzoquinonagenerada a partir de un ciclo catalítico en donde participa la HRP, su sustratoenzimático (H2O2) y el mediador redox (catecol). La corriente obtenida fueinversamente proporcional a la concentración de CIT en la muestra. Se determinaronexperimentalmente las concentraciones óptimas de mAb-CIT, OVACIT, velocidad deflujo. Se realizaron estudios de reproducibilidad y estabilidad del sensor. Se logródeterminar CIT en arroz para concentraciones cercanas a 1 ng mL-1.Referencias1- P. M. Scott, "Mycotoxins in Grain. Compounds other than aflatoxins", J. D. Miller,H. L.Trenholm (Eds.), Eagan Press, Minnesota, USA, Cap. 5, 1994.2- B. Xu, X. Jia, L. Gu, C. Sung, Food Control 17 (2006) 271.3- S. S. Deshpande, “Enzyme Immunoassays, from concept to product development”.Chapman &Hall (Eds), New York, 1996.4- F. J. Arévalo, G. A. Messina, P. G. Molina, M. A. Zón, J. Raba, H. Fernández,Talanta 80 (2009) 1986.