Desarrollo de un inmunosensor electroquímico para la determinación de ocratoxina A

P. R. PERROTTA; N. R. VETTORAZZI; F. J. ARÉVALO; M. A. ZON; H. FERNANDEZ

Córdoba

Congreso; XVII CONGRESO ARGENTINO DE FISICOQUIMICA Y QUIMICA INORGANICA; 2011

Asociación Argentina de Investigación Fisicoquímica

DESARROLLO DE UN INMUNOSENSOR ELECTROQUÍMICO PARA LA DETERMINACIÓN DE OCRATOXINA APatricio René Perrotta, Nelio Roberto Vettorazzi, Fernando Javier Arévalo, María Alicia Zón, Héctor Fernández.Departamento de Química. Facultad de Ciencias Exactas, Físico-Químicas y Naturales. Universidad Nacional de Río Cuarto. Agencia Postal N 3. (5800) – Río Cuarto, Argentina. pperrotta@exa.unrc.edu.arIntroducciónOcratoxina A (OTA) es una micotoxina producida por varias especias de hongos de los géneros Aspergillus y Penicillium [1]. En este trabajo, se presenta el desarrollo de un inmunosensor electroquímico (IE) y su optimización mediante el empleo de las técnicas voltamperometrías cíclica (VC) y de onda cuadrada (VOC) para la determinación de OTA. El inmunosensor está formado por micro-esferas magnéticas (EM) y electrodos de láminas impresas de carbono (ELIC).ObjetivosOptimizar por medio de medidas electroquímicas y espectrofotométricas los diferentes parámetros vinculados al desarrollo del IE.ResultadosLa determinación de OTA se basa en un inmunoensayo competitivo directo. Las reacciones involucradas en este inmunoensayo consisten en la competición de OTA y OTA-HRP por una cantidad limitada de anticuerpo (Ac) unidos a las EM modificadas con proteína G. Para ello, fue necesario la unión covalente de OTA con la enzima peroxidasa de rábano picante (HRP) y su posterior caracterización por métodos espectroscópicos y experiencias de ELISA. La HRP, en presencia del sustrato enzimático (H2O2), cataliza la oxidación del pirocatecol (H2Q) a benzoquinona (Q), la cual es susceptible de ser reducida electroquímicamente a H2Q sobre el ELIC a través de VOC. Mediante ensayos espectrofotométricos se determinaron las diluciones óptimas del Ac y del conjugado OTA-HRP, a fin de lograr una mayor sensibilidad y un amplio intervalo de concentraciones de OTA. Los valores encontrados fueron diluciones 1/1000 y 1/64 para el Ac y OTA-HRP, respectivamente. Se realizó un estudio para determinar el comportamiento electroquímico de H2O2 y H2Q en el sistema de ELIC. Los voltamperogramas mostraron un potencial de pico anódico de (Ep,a) 0,239 V vs Ag y su correspondiente pico catódico de (Ep,c) 0,141 V vs Ag. También, se optimizaron los parámetros de activación y estabilización electroquímica de los ELIC. Por otro lado, se determinó la cantidad adecuada de EM. Las respuestas de corrientes (Ip) fueron proporcionales con la cantidad de EM, hasta alcanzar una masa de EM = 54 μg. Por otro lado, el volumen y concentración de H2O2 y H2Q fueron optimizados. Se encontró una mejor respuesta de corriente a una concentración 10 μM tanto para H2O2 como para H2Q. En cuanto al volumen de trabajo, se encontró 20 μL de solución como valor óptimo.ConclusionesSe pudieron determinar, mediante técnicas electroquímicas y espectroscópicas, diferentes parámetros de la reacción inmune para el armado de un IE para la determinación de OTA. Por otro lado, se optimizaron electroquímicamente los ELIC a fin de lograr reproducibilidad y estabilidad en la reducción de Q.Bibliografía[1] “Micotoxinas en Alimentos”, J. M. Soriano del Castillo (Director-Coordinador), Ediciones Díaz de Santos, España, 2007.